地狱级难养的干细胞,教你分离培养及鉴定一次顺利完成(超全)

2023-10-15 17:31 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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之前跟导师说自己熟练培养各类细胞,结果导师非常信任的让我培养干细胞并鉴定分化潜能,结果可想而知……间充质干细胞真的很难伺候!


 细胞生长缓慢活性差,怎么处理?

 细胞形态千奇百怪加上老化,如何拯救?

 接种细胞起始浓度和胰蛋白酶的浓度,如何摸索条件?

 支原体污染,又如何检测和防护……


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间充质干细胞生长缓慢,该如何改善?

 尽量使用低代次细胞进行实验;

 接种密度:建议 2.5~4×104 个活细胞/cm2

 消化时在显微镜下看到大部分细胞变圆不贴壁,拍打培养瓶两侧大量细胞脱落,此时立即终止消化;

 定期做支原体检测,排除支原体污染。


间充质干细胞传代的胰酶浓度和细胞密度要如何控制?

 胰酶浓度:推荐胰酶使用浓度为 0.25%(含 0.04% EDTA),使用之前需预热至 37 ℃ 且 pH 值应维持在 7.2 左右。切忌消化过度(包括胰酶浓度过高、消化时间过长等),否则会导致细胞死亡、分化、状态变差,分化能力丢失等现象。

 接种密度:一般细胞接种密度为 2×10个活细胞/cm2 即 5×105 个活细胞/T25,不同的干细胞接种密度会稍有差异,比如 hMSC,我们推荐的传代接种比例为 1:2。


Tips:不同种类的干细胞差异很大,特别是与肿瘤细胞株的差异更大,很多经验不可以直接使用,消化时需要仔细摸索最佳的时间。


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关于赛业 OriCell®


OriCell® 是赛业旗下致力于细胞生物学的子品牌,深耕科研干细胞领域 17 年,拥有规模庞大、品种齐全的科研干细胞库,包括不同种属、不同组织来源的原代干细胞和配套培养体系,以及成熟稳定的干细胞技术服务平台,助力客户文献发表数千篇。


内容策划:邹礼平
内容审核:朱卿

题图来源:图虫创意

编辑: 王凯

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