除了常用的 RT、QPCR,本文还详细整理了其他几种 PCR 的选择与区别、实验方法和常见问题汇总,并做成专题。
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多重 PCR普通 PCR 仅对单一基因进行定性或半定量,对多个基因进行检测时需要分为多个独立体系进行扩增,虽操作简单,但工作量大,耗时耗力浪费样本及试剂。
而多重 PCR 同时能够比对多个扩增子,联合应用 RT-PCR 技术还可达到定量的目的。不仅如此,多重 PCR 还被用于靶向建库测序技术中的文库快速构建。
多重 PCR 常被用于:病原体识别、高通量 SNP 基因分型、突变分析、模板定量、连锁分析、RNA检测、法医研究。
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原位杂交 PCR原位 PCR 常用于研究疾病的发病机理、临床过程及病理的转归、分子生物学、细胞学、分子病理学及临床诊断领域等。
具体应用举例如下:
1.在样品中目标核酸含量低,原位杂交法灵敏度不够时,可采用原位 PCR 以高特异性、高灵敏度检出样品内的微量核酸;
2.确定目的基因或病毒的亚细胞定位;
3.可用于确定拥有某目的基因的细胞数量或百分比,如协助确定感染某种特定病毒的细胞数量,或具有激活的病毒基因表达的细胞数量,具有肿瘤基因的细胞百分比,确定转移性肿瘤的来源等;
4.快速鉴定细菌物种等等。

RACE 实验
cDNA 末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)是一种基于逆转录 PCR从低丰度的转录本中快速扩增 cDNA 的 5' 和 3’ 末端的有效方法。
需要得知 cDNA 两端序列信息时,或仅利用 poly(A) 尾无法获得全长 cDNA 时,可使用 RACE技术快速且特异性的获得 cDNA 全长序列。
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