细胞间最近频繁遭遇「不测」，细胞动不动就吹打不均匀成团，师妹上周复苏的 5 盘细胞莫名飘了 2 盘，师兄的珍贵原代细胞竟然也污染了，细胞培养箱里的水盘也突然间干涸......
师姐
细胞间最近真的水逆，进进出出人太多，这次必须立点规矩了。
咱们就立个规矩「7 不做」吧！不消毒不做细胞实验、不穿戴实验服不做细胞实验、不轻拿轻放不做细胞实验、不高温消毒不夹细胞片、不记录实验过程不做细胞实验、不开紫外不离开细胞间、不看视频 protocol 和常见 QA 不做细胞实验～
师兄
师妹
笑死！我们一定会严格遵守～不过我转染的细胞，成活率很低，「7 不做」也不管呀，我能申报买一瓶专用培养基吗？
刚好美仑的减血清培养基有个免费试用活动，你们参加吧！申请后别忘了看视频 protocol 和常见 QA！
师姐
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万能细胞培养操作视频
接下来一起看看万能视频以及 9 大常见问题吧，一站式解决你们的细胞培养问题。
MeilunBio®作为细胞实验一站式服务专家，将为您提供实用的细胞培养技巧和建议，无论是细胞的选择、培养基的配制，还是培养条件的优化，都有专业的技术团队为您提供全方位的指导。这些视频将为您展示细胞培养的基础操作，让您更加自信地面对实验中所遇到的挑战。
1. 细胞复苏操作
2. 贴壁细胞的传代
3. 悬浮细胞的传代
4. 贴壁细胞的冻存
5. 悬浮细胞的冻存
MeilunBio®细胞培养系列产品遵循 ISO9001、ISO13485 管理体系，由符合国标《GB/T 42061-2022 医疗器械质量管理体系》要求的自动化生产线生产，建立有先进合规的质量控制平台，每一批产品除了常规无菌、理化指标检测外，还进行性能测试，保证每一批产品的质量和批间稳定性。
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9 大细胞培养常见问题与解答
看完了标准化的细胞培养视频后，相信你的细胞不会再因操作不当而状态不佳、污染、漂浮了。不过养细胞状况百出，以下常见问题也需格外注意。
1. 细胞有的地方长得很满，有的地方很少，可以传代吗？
细胞局部长的过满就要传代了，接种的时候注意细胞接种的均匀性，放到培养箱前摇晃均匀；如果是只有偶然一次细胞这样长的不均匀，可能是没有摇均匀，如果不同批次处理的其他细胞也出现这个情况，都是一侧长的过满，一侧长的稀疏，大概率是培养箱不水平，可以下面垫些东西，用水平测量仪测量一下是否矫正好，或者直接找设备厂家过来调下水平。
2. 细胞成片脱落可能原因：
（1）跟细胞种类、性质有关，有的细胞容易结团，可能会成片自己脱落；
（2）与消化过度有关，下次消化请缩短消化时间，消化后轻轻吹散细胞。
3. 如何去除培养液中的死细胞？
可以降低离心力，用 200～250 g 离心，4～5 min，活细胞离心沉淀，死细胞和细胞碎片未完全离心下来，弃去上清收集细胞沉淀进行后续培养。
4. 冻存细胞复苏后，细胞没有贴壁怎么办？
请注意冻存管是否完好，是否有解冻情况，如果细胞在冷冻过程中有融化现象，则会影响细胞的复苏效果。如状态正常，则请注意以下几点：
① 请牢记冻存和复苏的原则：慢冻快融。缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞不会因产生大的冰晶而受到损害；复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶。
② 在复苏前，一定要先清楚地了解这份细胞的增殖能力。如果增殖能力不高，接种时就要增加细胞接种密度并额外添加 5%～10% 的血清。如果细胞本身数量就非常少，复苏后 3 天内尽量少对细胞进行操作，延迟换液时间。
③ 细胞复苏 2～3 天后，很多人认为细胞没有明显增殖就扔掉细胞，但其实有些细胞需要复苏一周后才会发生明显的变化。如果复苏培养 3 天后细胞仍不见增殖，先不要着急换液。试着补加血清、细胞因子，等一周后再看细胞增殖情况再定。
5. 细胞内有空泡，是否是正常现象？
部分细胞本身存在一定的空泡（如 HepG2 及一些耐药株等），这个是正常现象。如果只有少数细胞内出现极少空泡，则很可能是细胞状态不佳，可以通过调整血清浓度，控制消化，控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态；如果大部分细胞出现空泡，且单个细胞内空泡数目偏多，则可能细胞代次较高，细胞老化所致，需更换代次较早的细胞。
6. 细胞传几代后开始逐渐状态变差，死亡的原因？
（1）很可能是培养体系不适合细胞（未使用推荐的培养体系）；
（2）可能消化过度，对细胞有严重影响；
（3）可能是传代比例不合适（具有密度依赖性的细胞，传代太稀；或者生长较快的细胞，传代较密，细胞严重堆叠生长）。
7. 细胞生长缓慢是什么原因，如何处理？
（1）更换了血清或者培养基，细胞需要一段时间适应一下。
解决办法：如果实验室没有某种细胞最适宜的培养基，可以先用原培养条件冻存一些，然后梯度替换成新的培养体系，传代 3～5 次后，让细胞慢慢适应。
（2）由于细胞的特殊种类，培养基中缺少某些生长因子。
解决办法：可以向培养基中添加适量所需的细胞生长因子，保证细胞的培养条件。
（3）传代的时候细胞密度过低。
解决办法：适当增加细胞的接种密度，可按照该细胞厂家建议的细胞密度进行传代接种。
（4）细胞状态老化。
解决办法：细胞老化的原因主要有：① 在体外传代次数太多或太久；② 培养液营养不够，换培养液应该根据细胞消耗培养基的情况来确定是否该换，不要等培养液过于黄了再换液；而且细胞对血清比较敏感，直接影响细胞的生长。③ 消化过度，消化对细胞的表面蛋白质有一定破坏作用，因此不能长时间进行消化并且在选择消化酶时也要选择较为合适浓度。
8. 有的细胞有小黑点，是正常状态吗？
有的细胞刚复苏会有一些小黑点是因为细胞质里面的东西，有的分泌到细胞外，不是染菌。培养悬浮细胞的时候细胞密度如果小，可以将培养瓶竖起来进行培养，然后可以不用每次离心传代，如果增殖速率慢可以适当提高血清添加比例，然后进行培养，增殖密度大了先分瓶进行培养，不要每次离心换液；不能用原瓶培养，因为有些细胞碎片及分泌物还是会贴在瓶底，所以看起来还是会有影响的，最好是换瓶子。
9. 悬浮细胞传代几次后细胞状态很不好，有很多细胞碎片怎么处理？
较脆弱细胞建议补液法传代，如果碎片多的时候再离心，因为离心机械损伤较为严重，所以碎片可能是经常离心导致的；另一种可能是培养条件不合适细胞状态不佳导致的碎片，也有可能是缺少营养，一般与密度过大、细胞长得过快、培养液pH降低有关。
解决办法：
（1）较为脆弱的悬浮细胞传代时建议您使用半换液法，减少机械损伤。
（2）建议使用优质血清进行培养。
（3）悬浮细胞对密度较为敏感，培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围。一般不超过 300 万细胞/mL，建议将活细胞密度控制在 10 万～100 万 cells/mL 之间；传代密度：10 万活细胞/mL。
以上就是《万能细胞培养操作视频》还有 9 大常见问题解答，看到这里别忘记申请试用哦！
Optimal-MEM 减血清培养基是一种以 Minimal Essential Medium（MEM）为基础经过改良的减血清培养基，能够在减少 50% 胎牛血清（FBS）添加量的情况下培养各种悬浮和贴壁哺乳动物细胞，包括 Sp2/0、AE-1、CHO-K1、BHK-21、HEK 293T、Vero 等。提高转染效率，更快 get 结果。
内容策划：邹礼平
内容审核：钟可可
题图来源：图虫创意