谁懂啊?这个没公德心的就是我~着急推进课题,暑假早 8 晚 8 两眼一睁就做细胞分选,是真的做不完啊!流式一约就是好几天,真的很怕别人说我霸占机器……
早出晚归可结果却不如意,也不知道是时间线拖得太长,还是操作有问题,中途计个数,发现细胞活的没多少了,分选完种在孔板里,第二天竟然被污染,全军覆没!
实在没办法了,找师姐求助。没想到师姐一句话,我直接破防~
师姐:你糊涂啊!没必要死磕流式啊!只是需要小鼠外周血的 CD4+ T 细胞的话,完全可以用磁珠分选,对细胞损伤小,而且时间短流程简单。细胞活性和污染等问题,可以翻翻我下面的笔记,你赶紧去补救一把。
做细胞分选需要根据实验样本、实验目的选择适合的方法来获取目的细胞。如果你也迫切需要更高效、更可靠的方法来解决细胞分选的难题,不妨试试 STEMCELL 细胞分选试剂盒吧!多种类型细胞试剂盒以及配套产品全线放送!满足不同细胞分选需求。现在开学季福利限时买一送一,多买多送,下单更有机会抽取万元大奖!现货速发、可免费上门协助实验,全力为您的免疫学研究保驾护航!(活动产品与详情见文末)🎁
师姐笔记,请查收~
从不同的组织样本中分离细胞需要注意的点
由于疾病样本中的细胞比例与正常样本不同,我们更推荐使用正选的方法来分选疾病样本中的细胞。
若需要从小鼠脾脏分离树突状细胞,推荐使用酶解法制备单细胞悬液;若需要从小鼠脾脏分离 T 细胞或 B 细胞,推荐使用机械解离法制备单细胞悬液。
从非淋巴组织分离细胞时,通常使用酶解法来解离组织以制备单细胞悬液。
从冻存样本制备单细胞悬液时,需要使用 DNase I 减少 DNA 悬浮碎片和细胞团块。
分选对细胞活力是否有影响?整个过程能做到无菌操作吗?
目前常见的分选方式,如流式,磁珠,密度梯度离心等,都不可能做到对细胞活力完全无影响;相对来说无柱磁珠分选或密度梯度离心法无需通过狭窄管道, 对细胞活力的影响较小。除分选方式外,细胞活力也与分选时长,起始样本处理方法,buffer 的选择等有关。
常用的测定细胞活率的方法是评估细胞膜的完整性,可使用活细胞染料,如 7-AAD 或台盼蓝。可以做到细胞分选的无菌操作,相比于磁珠分选,流式分选因仪器设备问题,清洗麻烦,且分选时间较长,更容易染菌。使用磁珠分选可以很好地避免这个问题,只需在生物安全柜中操作即可。
如何有效评价磁珠分选实验的结果?
可以从分选后细胞纯度、细胞得率、细胞活性三个方面分析磁珠分选效果:
① 细胞纯度检测:纯度占比 = 分选后目的细胞数量/分选后细胞数量,通过流式检测分析目的细胞纯度;
② 细胞活性检测:通过流式检测(死活染料)分析活细胞占比;通过细胞计数仪用台盼蓝或其他染料染色检测细胞活性;
③ 细胞得率检测:得率占比=分选后目的细胞数量/分选前目的细胞数量,通过分选前细胞计数和分选后细胞计数实现
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了解完这些细胞分选的小 tips,相信你在进行实验时会更加得心应手。而在细胞分选的过程中,合适的试剂盒更能够为实验提供极大的助力。为了回馈新老用户,STEMCELL 大促来啦!这一次,我们火力全开无论在时间或是促销力度上,我们都将给予最诚挚的回馈,细胞分选产品买一送一,多买多送,让你的细胞分选实验更加高效、便捷。
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活动对象:
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内容策划:潘成
内容审核:吴军
题图来源:图虫创意