向各位科研姐妹求助！Transwell 细胞迁移都做了 72 h 了，肉眼可见细胞没穿过去多少。眼瞅着给的药都要用完了，真是火烧眉毛
怎么建立 Transwell 细胞迁移体系？为什么迁移结果总是不理想？有哪些技巧可以帮助改善实验结果，提高实验效率？
要做好 Transwell 细胞迁移实验，适宜的细胞数量和细胞活力是迈向成功的关键一步。准确高效地检测细胞数量将使我们的实验事半功倍。
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Transwell 实验 3 个 tips
确保适宜的细胞数量和活力
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● 选择活力较好的细胞进行接种。接种前进行细胞计数，调整细胞接种数量在 1 万～10 万之间（建议最初实验时多设置几个细胞接种密度进行试验，不同细胞迁移能力会有差别）。细胞数量过多或者过少都会对其迁移效率有重要影响。
● 细胞计数方法：
1. 人工计数
用活力测定染料（如台盼蓝）对细胞进行染色。在显微镜下，进行人工细胞计数。用时大约 10～15 min。
2. 自动化细胞计数
2.1 基于图像的细胞计数
采集并制备细胞样品。将细胞稀释至适当浓度（选做）。使用活性标记物将细胞染色（选做）。将样品装载至计数板、计数室或样品载体上，然后将计数板装载到仪器中。仪器随即进行计数，并立即在显示屏上显示计数结果。用时大约 3～5 min。
2.2 电阻抗式细胞计数
2.3 流式细胞术
Note：具体细胞计数方法及选择可参考《细胞计数指导手册》，手册详细内容完填上述问卷即可下载查看。
细胞接种技巧
● 向小室内加入细胞悬液时，一定要轻轻缓慢匀速打入，可采用「Z」字形打法，避免细胞聚团。
● 避免小室里面、下层培养液和小室之间产生气泡。一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用可能会减弱甚至消失。
细胞穿膜难怎么办
● 细胞接种前要用 PBS 清洗两遍除去原有培养集中的血清，小室的细胞培养基一定确保无血清，血清会限制其迁移能力。
● 难穿膜的细胞可以先用无血清培养基饥饿处理 12～24 小时后再进行实验。
实验过程中，相信大家都吃过人工细胞计数的苦，一不小心数错了或者算错了，对后续的结果会有很大影响。梅特勒托利多作为大家实验室的好帮手，推出最新产品 CytoDirect 自动细胞计数仪，帮助大家轻松解决 Transwell 实验关键一步——细胞计数难题！
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产品亮点：
告别染色：
CytoDirect 的检测技术无需进行具有细胞毒性的染色步骤即可进行活力评估，从而提高了样品的完整性，并消除了容易出错的步骤和用户间的差异。
便携设计：
CytoDirect 不受场地限制，专为便携性而设计：坚固耐用、可充电，可通过 Wi-Fi 连接进行无线数据传输，可带到实验室任何地方使用，甚至放置于超净台下，并且可以消毒！
测量可靠：
CytoDirect 采用超大测量视场-比标准血球计数器大 30 倍，显著提高了单次测量的准确性。
简单易用：
CytoDirect 使用非常方便，仅按照屏幕上的提示进行操作，15 秒内完成细胞计数与活力评估。借助内置的故障排除指南，还可快速了解您的样品制备和工作流程是否正确。
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内容策划：王丹琦
内容审核：朱晓芳
题图来源：图虫创意