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一条网上的热帖，关于 WB 条带定制实验造假引起了广泛关注。
店主称：发我你想要的目标蛋白，趋势，我能跑得明明白白。不只 western blot、CoIP 也能接，实验周期 2—4 天，现做现卖。此外店主还承诺邮寄原始条带送给你，以避免被期刊质疑。
详情页中的参考样式图也琳琅满目，看起来都比科研人自己跑得清秀。这下好了，谁还分得清真假 WB。
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而购买的用户也真不少，不禁让人后背发凉。其中一款热门商品，因为价格低廉（200 元），竟然已售 4000 份。
相信每一个开组会的人都没必要斥巨资买一个条带吧～那说明购买的用户还真是铁了心想发期刊，搅浑学术圈的泥巴水！
不过 WB 实验频繁造假的背后，逃不开实验本身的「坎坷」。作为第一代玄学实验，WB 真的太太太容易翻车了。
要么是辛辛苦苦跑的蛋白，条带不清晰没办法使用，要么就是趋势不明显，条带淡得可怜。
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本文学霸菌整理了 6 个 WB 实验细节技巧，带你从细节手法出发，优化 WB 实验结果。6 个 WB 细节，带你靠自己的双手，拿到漂亮图！
样本切记煮沸勿偷懒
煮沸的首要目的是使蛋白质完全变性，即破坏蛋白质的三级和四级结构，使其展开成线性形式。
这样，蛋白质分子在电泳过程中的迁移速率将主要取决于它们的分子量，而不是它们的构型差异。
将样本与加载缓冲液按 1:1 比例混合将混合后的样本在沸水浴中煮沸 5 分钟，这个步骤可以确保蛋白质的变性。
煮沸过程中，SDS-蛋白质复合物的形成更加均匀，有助于蛋白质在凝胶中的一致性迁移。
煮沸后立即将样品置于冰上冷却，这一步是为了终止变性过程，防止蛋白质在高温下过度降解或重新聚集。
加载缓冲液的成分：0.5M Tris-HCl pH 6.8
加载缓冲液的成分：2% SDS
加载缓冲液的成分：10% 甘油
加载缓冲液的成分：0.01% 溴酚蓝
加载缓冲液的成分：5% β 巯基乙醇
通过这些步骤，可以确保蛋白质在凝胶电泳中的表现更加一致和准确，从而得到可靠的实验结果。
电泳条件需谨慎遵循
电泳条件对于 Western Blot 实验的成功至关重要，因为它们直接影响蛋白质的分离效率和结果的清晰度，但是很多同学会「凑合用胶」，没有完全根据目标蛋白大小选择合适的凝胶浓度和电泳条件。
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不过也要注意，电压推荐是针对恒定电压条件下的电泳，实际使用时应根据凝胶的尺寸、电泳槽的类型以及具体的实验条件进行调整。
另外对于较小分子量的蛋白质，可能需要使用较高的电压以加快迁移速度，但要注意避免过热和条带压缩。
对于较大的蛋白质，使用较低的电压有助于减少条带压缩，但可能需要更长的电泳时间来确保充分分离。
最后，实验中可能需要根据具体的实验结果调整电压和凝胶浓度，以获得最佳的分离效果。
ECL 底物添加有技巧
提供足够的底物以产生稳定的化学发光信号。不过一定要严格按照制造商提供的说明书来配制 ECL 底物。很多同学在这步容易使用已经配置、使用过的 ECL 底物，可能会影响研究结果。操作步骤：配制 ECL 底物
膜的预处理
浸泡膜于 ECL 底物中
去除膜表面多余底物
封闭袋内成像
使用手套做实验！千万别触碰
使用一次性手套在实验室中是基本的无菌操作要求，尤其在细胞间，但是出了细胞间，很多同学就开始用「回收手套」，甚至不戴手套拿个管子瓶子，这也会对 WB 实验带来交叉污染。可能影响：交叉污染
可能影响：样品降解
可能影响：膜损坏
可能影响：试剂污染
在实验过程中，除了佩戴手套外，还应根据实验内容采取其他个人防护措施，如实验室大衣、护目镜等。
通过遵循这些操作指南和注意事项，可以最大限度地减少实验过程中的交叉污染，确保实验结果的准确性和可靠性。
注意仪器的日常维护
最后的最后，别忘记提醒实验室研究员定期校准电泳仪和转膜仪，检查电压和电流的稳定性。
清洁和维护设备，确保无漏电或短路；校准应记录电压、电流和时间，确保设备在规定范围内运行。
日常维护：每次使用仪器后进行，主要是清洁工作，确保仪器表面和操作区域的清洁。
月度检查：每月进行，重点在于检查仪器的所有控制元件和指示系统是否正常工作。
季度检查：每 3 个月进行一次，电泳仪和转膜仪分别进行性能校准和温度系统检查，以确保设备性能稳定。
半年检查：每 6 个月进行深度清洁和安全检查，包括清洁难以触及的部分和检查电线、连接器等，以确保设备安全。
通过精确控制这些关键细节，相信大家也可以显著提高 WB 实验的成功率和结果的可靠性。拒绝科研造假，用自己的双手做出漂亮条带！
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