作为一个实验老手，在其他实验上信手捏来，唯独在构质粒上还处于菜鸟阶段，每次都「谨小慎微」！最近和 00 后小师妹一起做分子克隆，我真是被上了一课：
做 DNA 片段扩增时
我
多次检查试剂的添加量和仪器的设置参数，还特意增加了 PCR 循环次数。
对着 protocol 设定 PCR 反应体系，设置好循环次数后就去看文献了。
师妹
结果出来后发现，师妹的结果没问题，我的却莫名出现了非特异性扩增问题。
在质粒提取时
我
担心质粒提取量不足，加大了菌液的使用量。
按比例分了几份，取了适当的量之后就开始做提取了。
师妹
没想到过多的菌液会导致裂解不彻底、杂质变多，后续的纯化步骤变得困难，质粒的纯度和得率反而下降。
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全程目睹这一切的导师直呼让我放轻松，然而分子克隆实验涉及到核酸提取、酶切、连接、转化等诸多步骤，每个步骤确实都需要精确的操作和严格的控制，而且这些实验结果对后续的研究又至关重要……一想到这些，真的很难保持松弛啊！
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课程内容抢先看：
1
PCR 成功要素
2
影响胶回收的因素及注意事项
3
影响酶切连接的因素及注意事项
4
转化失败的常见问题和对策
5
质粒提取的原理及注意事项
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内容策划：沈佳钰
内容审核：钟可可
题图来源：图虫创意