
师弟
师姐,我的暑假要泡汤了,老师安排做基因克隆实验,说做完就放假。我天天两眼一睁就是 P,可不是复孔间重复性差,就是产物测序结果不准确,真的没办法了
复孔重复性差可能是加样操作的问题;而基因克隆需要用高保真酶来确保扩增片段的准确性,常规的 DNA 聚合酶达不到这么高的要求。

师姐
可以试一下我最近免费申请的即用型超保真 PCR 预混试剂,使用时只需加入 DNA 模板和引物,最大限度地减少人为误差,而且可以确保扩增片段的准确性!

师姐
为了给广大科研用户的实验保驾护航,GenStar 推出即用型超保真 PCR 预混试剂免费试用活动,助力你的实验 UPUPUP!
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2 × SuperNova 超保真 PCR 预混液;2 × SuperNova HTS 超保真 PCR 预混液 ;2 × SuperNova Max 超保真 PCR 预混液;2 × SuperNova Max 超保真 PCR 预混液(染料)
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DNA 聚合酶保真性的测定方法
DNA 聚合酶的保真度常用错误率的倒数表示(保真度 = 1/错误率),指发生错配的核苷酸数与聚合的总核苷酸数的比值。通常,保真度表示为与 Taq DNA 聚合酶保真度的相对值。

以北京康润诚业生物科技有限公司(GenStar)的 SuperNova HTS DNA Polymerase 为例,采用蓝白斑筛选的方式测定其保真度,错误率比 Taq 低 100 倍。

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为何需要 GenStar 超保真 PCR 产品?
GenStar 超保真 PCR 产品对于需要高精度 DNA 序列信息的研究和应用至关重要,尤其是在基因表达、基因克隆、突变检测和建库测序等领域。
基因表达

基因表达研究在遗传学及生物学领域中占据核心地位,其重要性在于揭示基因如何指导蛋白质或功能性 RNA 的合成,进而控制生物体的生长、发育、代谢及环境适应等关键过程。
一般实验流程如下:

在基因表达研究中,使用较长的 DNA 片段能够包含完整的基因及其调控元件,这对于深入理解基因的表达调控、剪接变体和功能至关重要。此外,较长片段有助于保持基因在细胞中的自然表达模式,从而提高基因操作的准确性和生物学研究的相关性。
但是,长片段的扩增难度会比较大,要么产物量低、要么有较多非特异,带来很多困扰。GenStar 品牌的 2 × SuperNova PCR Max Mix(Cat#A066)采用优选超保真酶,搭配特殊配置的 Buffer,赋予了强大的长片段扩增能力,轻松驾驭至 20 kb 的扩增长度,为探索基因组的深邃奥秘提供利器。

注:1 表示模板量 300 ng;2 表示模板量 75 ng;3 表示模板量 150 ng;4 表示模板量 10 ng
突变分析

突变分析是一种关键的生物技术,用于识别和研究基因序列中的变异,这些变异可能与遗传疾病、药物反应或生物学特性有关。
GC 富集区因其独特的 DNA 结构特性,如增强的热稳定性和可能的突变倾向,成为定点突变研究的关键区域,有助于深入探究基因表达调控、蛋白质-DNA 相互作用、遗传疾病机制以及基因组的稳定性和变异,从而在分子生物学和遗传学研究中占据重要地位。
GC 富集区域的高 GC 含量导致 DNA 双链结构更紧密,增加了热稳定性,使得 DNA 聚合酶难以有效延伸。此外,GC 富集区还可能形成复杂的二级结构,进一步阻碍了扩增过程中 DNA 的正常解旋和复制。GenStar 品牌的 2 × SuperNova PCR Mix(Cat#A064)采用精心调制的配方,专为高 GC 样本设计,具备卓越的扩增能力,能够高效、准确地复制 GC 含量丰富的 DNA 模板,确保分子研究的质量和可靠性。

注:1 表示 GenStar A066 + Enhancer;2 表示 GenStar A064;3 表示品牌 V
基因克隆

基因克隆是一种分子生物学技术,包括 TA 克隆、TOPO 克隆和无缝克隆等,它允许研究工作者从一种生物体中提取特定基因,并在实验室条件下在生物体内的基因组中引物特定遗传变化,实现特定基因的富集或表达。
同源重组是基因克隆中一种高效的技术手段,它依赖于序列同源性实现目标 DNA 片段的精确插入或替换,从而确保基因编辑的准确性和效率。然而,在同源重组的过程中可能遇到保真度不够,特异性不强等问题,这些问题可能会影响实验的准确性和成功率。
GenStar 品牌的 SuperNova DNA Polymerase(Cat#A164)是在 pfu 基础上优化的超保真 DNA 聚合酶,其保真度相当于普通 Taq DNA 聚合酶的 80 倍,延伸速度为 15~30 s/kb,性能优异,(GenStar 的无缝克隆产品 T196 内就采用了 SuperNova DNA Polymerase)。



注:1 表示 GenStar A066 + Enhancer;2 表示品牌 V;3 表示品牌 N;4 表示品牌 T
高通量测序
高通量测序是一种先进的分子生物学技术,广泛应用于基因组学研究和临床诊断。这一流程从样本的核酸提取开始,经过严格的质量评估和片段化处理,构建出适合测序平台的 DNA 或 RNA 文库,建库的质量对于测序的成败起到至关重要的作用。
建库样本通常包含高度复杂的遗传信息和多种分子类型,这要求 PCR 扩增过程必须具备超保真性和高特异性,以确保样本的多样性和复杂性得到准确反映。同时,高要求的准确性对 PCR 过程提出了挑战,需要精确控制反应条件和优化引物设计,以避免非特异性扩增和错误引入,保障测序结果的可靠性和科学性。
GenStar 品牌的 2×SuperNova HTS PCR Mix(Cat#A069) 专为建库测序设计,其保真度相当于普通 Taq DNA聚合酶的 100 倍,对 GC 偏好性小,错误率极低;同时具有优良的样本适用性, GC 兼容度达 20%-80%;6kb 以内片段的延伸速度最快可达 15s/kb。
样本普适应好

注:1 表示 GenStar;2 表示进口品牌 K
以已知病毒模拟咽拭子作为样本,使用 GenStar 超保真聚合酶,与进口品牌高保真酶结果比较:

结果显示,使用 SuperNova 超保真 DNA 聚合酶应用于未知病原富集检测项目,富集的病毒检出情况表现良好,病毒的覆盖度较进口品牌高保真酶更优。
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北京康润诚业生物科技有限公司作为国家级高新技术企业,专注于分子生物学核心原料领域,历经十余年的发展,始终坚持自主创新,开发出一系列的超保真 PCR 产品,针对不同的场景可灵活选择,总有一款适合您。

此外!活动期间,参与试用活动就有机会获得 200 元~3,000 元不等的奖励,您的诗和远方,GenStar 为您买单!

内容策划:邹礼平
内容审核:钟可可
题图来源:图虫创意