亲手带大的师弟样样都好，没想到第一次独立做课题，就在 RNA 提取上栽了跟头……
师弟
师姐你这次真的要救救我，我以前帮你提取 RNA 时候可没有一次失败，怎么轮到自己样本都毁了呢？
怎么个事儿？
师姐
师弟
最近我在做 3D 细胞的课题，听说柱法提取 RNA 纯度高，所以我就没用 TRIzol 试剂……
谁跟你说 TRIzol 试剂提取纯度不够高？
师姐
我们在选择提取方案时需要根据不同场景，综合考虑成本、操作复杂性、提取纯度、设备条件，尤其是样本类型，来选择最合适的方案。而 TRIzol 试剂因为它的操作简便性和多分子提取能力而被大家普遍接受。一款好用的 TRIzol 试剂能让你的实验事半功倍！赛默飞即用型 TRIzol 试剂，可以在 1 小时内从人类、动物、植物、酵母或细菌来源的细胞和组织样本中提取高质量的总 RNA（以及 DNA 和蛋白质），更能维持 RNA 的完整性。
实力并非「空穴来风」
靠硬实力说话！
在转录组测序（Bulk RNA-seq）、3D 细胞培养、多组学分析这些场景中，赛默飞 TRIzol 试剂都曾帮助研究者登上顶刊。
1、转录组测序（Bulk RNA-seq）应用案例
目前很多研究为了明确单细胞测序分析结果的准确性，会同时进行 Bulk RNA-seq 和 single cell RNA-seq，可以利用相同样本的 Bulk RNA-Seq 数据进行评估整个样本中所有基因的表达水平，两种测序结果相互印证。而赛默飞 TRIzol 试剂出色的裂解性能可以为转录组测序中研究转录本的异质性和复杂性提供制备高质量 RNA 样本。
● 2024 年 5 月 3 日发表在 Science 上的《A blueprint for tumor-infiltrating B cells across human cancers》[1]，利用单细胞测序数据分析了 20 种癌症类型中 269 位患者的 474,718 个 B 细胞，其中 Bulk RNA-seq 是通过赛默飞 TRIzol 提取的 RNA，随后，通过结合基因表达谱、BCR 序列和染色质可及性，研究了肿瘤浸润 B 细胞的多样性和可塑性，并确定了调控 B 细胞分化的潜在代谢-表观遗传机制。
● 2023 年 3 月 26 日发表在 Science 子刊上的《Cloning a profibrotic stem cell variant in idiopathic pulmonary fibrosis》[2]，其中，研究者对约 200,000～300,000 个细胞，通过赛默飞 TRIzol 试剂提取 RNA，检测 RNA 完整性指数（RNA integrity number ，RIN）后，将 RIN > 8 的 RNA 用于 RNA-seq 分析。
2、3D 细胞培养的 RNA 分离
采用有机法提取 3D 培养细胞中的 RNA 是目前使用最普遍的方法，赛默飞 TRIzol 试剂方便的提取过程以及在 RNA 完整度上的出色性能优势能够完全胜任 3D 细胞中的 RNA 提取工作。
● 3D 培养技术由于具有模拟体内自然系统的特点而得到了科学界的广泛关注[3]，3D 细胞模型包括球状体、类器官、支架、水凝胶、生物 3D 打印组织和芯片上的器官[4]。可通过对分离的 RNA 进行 RT-qPCR 来评估提取效果，以测量和比较球状体和类器官中的基因表达水平。TRIzol 试剂提取 RNA 在重复性和完整性上都有着出色的表现。
图 1，人类原代肝细胞球状体提取 RNA (来自三个不同供体)。
(A) 每个球状体有 1,500 个细胞、生长 5 天。(B) GNE 和 CDK4 表达的 RT-qPCR 分析。Ct 为三个重复的平均值（n = 3）。TRIzol Reagent：用 TRIzol 试剂提取 1 个原代肝细胞球状体的 RNA。TRIzol-8X：用 TRIzol 试剂提取 8 个原代肝细胞球状体的 RNA。
图 2，用 TRIzol 试剂从单个类器官中分离出的 RNA 的电泳图和 RNA 完整性指数（RIN）。
图 3，提取用 6 孔板培养的五周龄人脑类器官的 RNA。（A）用于提取 RNA 的 6WSSd3 类器官。（B）用四种不同方法从 6WSSd3 类器官中提取 RNA 后，检测 GNE 和 CDK4 平均 Ct 值。TRIzol Reagent：用 TRIzol 试剂提取的 1 个类器官。TRIzol-8X：用 TRIzol 试剂提取的 8 个类器官。
采用有机法提取 3D 培养细胞中的 RNA 是目前使用最普遍的方法，以文献中引用较多的Invitrogen™ TRIzol™ 试剂为例，其方便的提取过程以及在RNA完整度上的出色性能优势，深受广大科研工作者的喜爱。
3、多组学分析
赛默飞 TRIzol 试剂可从单一样本中依次分离代谢物和脂质，实现多组学研究。
● 2023 年发表在 Talanta 上，《Sequential isolation of metabolites and lipids from a single sample to achieve multiomics by using TRIzol reagent》 [5]，研究者通过赛默飞 TRIzol 试剂从单一样本中同时分离 DNA、RNA 和蛋白质以及代谢物和脂质，并确定上清液中存在代谢物和脂质，随后，通过使用赛默飞 TRIzol 分离出幽门螺杆菌的代谢物和脂质，与使用传统的 MeOH 和 MTBE 萃取方法分离出的代谢物和脂质，存在显著差异。
4、提取蛋白质交联 RNA 的有机相分离法
TRIzol 试剂是研究蛋白质-RNA 相互作用的结构和组成方面的一种有效方法，提供了提取蛋白质-RNA 复合物的思路。
● Jakob Trendel 团队在 Cell 发表了《The Human RNA-Binding Proteome and Its Dynamics during Translational Arrest》，介绍了 XRNAX--一种用于蛋白质交联 RNA 的通用纯化方法[6]，使用 TRIzol 试剂，分离 RNA（水相）和蛋白质（有机相）的经典方法，得到含有高浓度 RNA（> 1,000 ng/μL）和蛋白质（> 0.7 mg/mL）的提取物。并展示了蛋白质-RNA 相互作用的组成和动态方面的多功能性。
赛默飞 TRIzol 试剂为提取 RNA 提供了一种快速、简便、高效的解决方案，从多种生物样本中裂解细胞并沉淀总 RNA，在抑制 RNA 酶活性多同时，确保 RNA 的完整性和稳定性，识别下方二维码，了解更多顶刊同款 TRIzol 试剂信息或在线下单，一起简化 RNA 提取操作流程吧！
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内容策划：邹礼平
内容审核：吴军
题图来源：图虫创意
参考文献
[1] Jiaqiang Ma et al.,A blueprint for tumor-infiltrating B cells across human cancers.Science384,eadj4857(2024).DOI:10.1126/science.adj4857
[2]Shan Wang et al. ,Cloning a profibrotic stem cell variant in idiopathic pulmonary fibrosis.Sci. Transl. Med.15,eabp9528(2023).DOI:10.1126/scitranslmed.abp9528
[3]. Ravi M, Paramesh V, Kaviya SR, Anuradha E, Solomon FDP (2015) 3D cell culture
systems: advantages and applications. J Cell Physiol 230(1):16-26. doi:10.1002/
jcp.24683.
[4]. Fang Y, Eglen RM (2017) Three-dimensional cell cultures in drug discovery and
development. SLAS Discov 22(5):456-472. doi:10.1177/1087057117696795.
[5] Cheng-Yen Kao, Chung-Te Chang, Pei-Yun Kuo, Chia-Jen Lin, Huai-Hsuan Chiu, Hsiao-Wei Liao,Sequential isolation of metabolites and lipids from a single sample to achieve multiomics by using TRIzol reagent,Talanta,Volume 258,2023,124416,ISSN 0039-9140,https://doi.org/10.1016/j.talanta.2023.124416.
[6] Trendel J, Schwarzl T, Horos R, Prakash A, Bateman A, Hentze MW, Krijgsveld J. The Human RNA-Binding Proteome and Its Dynamics during Translational Arrest. Cell. 2019 Jan 10;176(1-2):391-403.e19. doi: 10.1016/j.cell.2018.11.004. Epub 2018 Dec 6. PMID: 30528433.