新来的师弟外泌体实验进展慢，导师组会发出「最后通牒」，半个月内拿出数据！科研人真的有苦说不出……
师弟
我真是小看了这个外泌体提取，不是纯度低就是得率低，害我做了这么久的无用功……
出现这种情况有几种原因：细胞状态不好，血清使用不当或者提取步骤需要优化。搞定这些，后续的纯化、鉴定、qPCR 或蛋白实验还有很多坑呢……
师兄
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为了更好的助力各位大家更好完成外泌体研究，我们整理了一些常见问题及其解决办法！
1、外泌体纯度低，受蛋白等其它物质污染
● 传统外泌体提取方法，如聚合物沉降法和超滤法，是造成大颗粒蛋白污染的常见原因。建议使用差速离心/密度梯度离心法，或使用专门的提取试剂盒。
● 除蛋白污染外，培养的细胞中死细胞释放的囊泡以及血清成分也会对外泌体纯度造成干扰，因此应保证细胞活性，并选择合适的细胞培养基。
2、超速离心提取时看不到沉淀
由于外泌体在样本中是微量存在，离心后无法看到沉淀是正常现象。可能原因是细胞上清或组织量太低、使用了不透明的超速离心管或离心时使用角转。建议扩大样品量，离心后用 PBS 重悬时不仅要洗脱肉眼可见的沉淀部位，还要吹洗离心管外侧靠近底部的狭长区域，并且使用透明离心管和水平转子，使沉淀更易观察。
3、外泌体保存不当
外泌体实验提倡现提现用，建议分装后 -20℃ 或 -80℃ 长期储存，同时避免反复冻融。
4、下游 qPCR 实验中内参的选择
外泌体没有公认内参，取决于具体样品，可以选择外源添加 cel-miR-39-3p，或内源 U6、SNORD61、SNORD68、SNORD72 作为内参。其中 cel-miR-39-3p 适用于内参表达不稳定或暂未发现合适内参的样品。
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直击问题根源，外泌体研究「一步到位」
外泌体是一种细胞分泌的小囊泡，可作为信号载体参与组织细胞间相互作用。外泌体体积很小,并且其中含有细胞特异性蛋白、脂质 RNA 等复杂成分，因此高效提取和纯化成为了一直以来存在的难点之一。
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内容策划：邹礼平
内容审核：吴军
题图来源：图虫创意