分子研究届的有句话说得好「留得基因在，不怕没课题」。通常就是搞定三步：筛基因、过表达、做验证，课题说有也能有。可真正开展实验，总有些令人沮丧的「意外」等着大家……（文末可免费获取技术资料）
师妹
最近实验水逆，想 PCR 扩增个目的基因做过表达实验。P 个两周还没见目的条带。
师弟
同命相连！我基因测序的建库实验都跪了，想找差异基因，硬是不给我机会啊。
师姐
我都担心要延毕！构了一个月质粒还没连上，别说后续过表达实验了。
这些问题出在哪❓❓❓
1.PCR 扩增不出理想条带
目的基因在扩增模板中表达量低：选择目的基因表达量较高的组织或细胞 cDNA 为模板；从头合成目的基因片段。
引物设计不特异，退火问题不当等：优化 PCR 反应体系；设置梯度降温程序。
2. 测序文库制备失败
基因组 DNA 提取不当，质量不高；cDNA 合成时，样本起始量低；所用试剂效率低。
3. 质粒构建失败
1）载体酶切不完全
酶切缓冲液不合适：建议使用随酶配套的缓冲液；若 DNA 溶液中盐浓度较高，可提前纯化 DNA，控制 DNA 溶液体积小于总体积的 25%。
酶切时间过短或温度不合适：使用前确认每种酶的最适温度；质粒量增加，酶切时间也要延长并增加酶量。
DNA 被抑制剂污染：可离心柱纯化 DNA。
2）载体和目的片段连接不上
载体易自连：可选择双酶切反应。
连接酶活性低：选择合适的连接酶；操作时全程置于冰上。
载体与目的片段比例不当：优化反应连接体系。
面对这么多问题，我们该怎么预防或应对？超全超靠谱的宝典来啦～为了帮助大家提前「避雷」，少出错，我们精心总结分子实验问题及解决方案，详见技术资料手册！点击文末「阅读原文」即可免费领取 2024 NEB 中文版 《产品目录及技术资料》印刷版本。
既然已经知道了问题及解决方案，在实际实验过程中，我们又该选择哪些高效可靠的试剂或仪器，使整个实验一气呵成呢？答案看这里……
50 年来，秉承「Scientists for Scientists」的理念，NEB 为基因扩增、二代测序、RNA 生物学、核酸纯化和糖蛋白工程等多个领域的科学家提供创新的工具及高品质服务。为了更好地服务于广大科研工作者，值此 NEB 成立 50 周年庆祝之际，NEB 推出全线限制性内切酶、T4 DNA 连接酶以及三代测序惊喜大促活动，以倾情回馈科研学者。
活动一：NEB 全线限制性内切酶限时买赠有礼！
活动规则：
活动期间购买 NEB 限制性内切酶，累计每满 3,000 元可获赠绿联拓展转接头一个，每满 5,000 元，即可获赠飞利浦口袋充电宝一个，每个实验室参与活动订单总金额不超过 25,000 元。
活动产品简介：
NEB 的科学家们不断优化现有限制性内切酶产品的性能，并积极探索这些酶在新技术领域的衍生应用。他们持续根据研究成果发表科学论文，同时在该领域获得了多项科研基金的支持。
作为限制性内切酶领域技术领先的研究团队，NEB 是首家将重组酶商业化、研发出切刻内切酶以及推出高保真（HF®）限制性内切酶的企业。此外，NEB 始终走在创新前沿，不断对限制性内切酶进行基因工程改造，通过这项工作，内切酶的品质和特异性得到显著的提升。
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活动二：T4 DNA 连接酶 7 折/75 折优惠
活动规则：
活动期间购买一支 T4 DNA 连接酶（M0202L/M/S/T）产品即可享受 75 折优惠，每买 5 支大包装 T4 DNA 连接酶（M0202L/M）即可享受 7 折优惠
注：7 折优惠仅适用于购买 5 个或 5 的倍数大包装 M0202L/M 产品，如您订购 6 支 M0202L/M 前 5 支享受 7 折，后 1 支享受 75 折
活动产品列表
活动产品优势简介
在质粒构建过程中，连接效率高、用时短以及普适性是科研人员对 DNA 连接酶的共同期望。NEB T4 DNA 连接酶支持粘性末端和平末端连接，反应快速，粘末端连接仅需 10 分钟；兼容性好，在 NEB 四种内切酶缓冲液中均有活性。尤其 NEB 经典且全能的 T4 DNA 连接酶（M0202）深受广大科研者的青睐。相比于同类产品，NEB T4 DNA 连接酶具有极高的酶纯度。NEB T4 DNA 连接酶卓越的质量、良好的口碑，为您的实验保驾护航。
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活动三：三代测序工具优惠让利，低至 6 折
NEB 已有多种产品工具被推荐用于三代测序平台的不同样本类型和不同应用的文库制备流程中。点击「阅读原文」即可免费获取 NEB 三代测序解决方案手册，了解更多工具应用详情。
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掌握技巧、选对试剂，一周完成质粒构建根本不是问题！优惠多多，不容错过，心动不如行动，赶快参与订购吧～
注：本活动只适用于从 NEB 官方代理商渠道购买产品的用户。点击「阅读原文」查询您区域内代理商信息，以及免费领取 2024 NEB 中文版 《产品目录及技术资料》印刷版本和 NEB 三代测序解决方案手册。
内容策划：潘成
内容审核：吴军
题图来源：图虫创意
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