2024 年首篇,施一公、刘如娟等团队合作取得新进展

2024-01-05 17:35 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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来源:iNature
相对保守的剪接体如何管理人类中发生的大量剪接事件 (人类约 200000,酵母约 300) 的机制尚不清楚。
2024 年 1 月 2 日,上海科技大学刘如娟、西湖大学施一公及圣裘德儿童医院 Xu Beisi 等团队合作在 Nucleic Acids Research 在线发表题为「THUMPD2 catalyzes the N2-methylation of U6 snRNA of the spliceosome catalytic center and regulates pre-mRNA splicing and retinal degeneration 」的研究论文,该研究发现一种 RNA 修饰-N2 -甲基鸟苷 (m2 G) 沉积在 U6 snRNA 的 G72 上 (剪接体的催化中心),促进了人类细胞中有效的 pre-mRNA 剪接活性。这种修饰在脊椎动物中被证实是保守的。
通过明确识别 U6 特异性序列和结构元件,THUMPD2 被证明是负责 U6 m2 G72 的甲基转移酶。敲除 THUMPD2 消除了 U6 m2 G72,破坏了 pre-mRNA 剪接活性,导致人类细胞中内源性 pre-mRNA 的数千个可选剪接事件发生变化。值得注意的是,异常剪接的 pre-mRNA 群体引发了无义介导的 mRNA 衰变途径。进一步表明,THUMPD2 与年龄相关性黄斑变性和视网膜功能有关。因此,该研究证明了主要剪接体的 RNA 表观遗传修饰如何调节全局前 mRNA 剪接并影响生理和疾病。

pre-mRNA 被称为「剪接体」的巨 RNA-蛋白复合物剪接成成熟的 mRNA,在真核生物中起着关键作用。从酵母到哺乳动物,剪接事件的频率从所有蛋白质编码基因的约 5% 增加到约 98%。在酿酒酵母的约 6000 个基因中大约有 300 个基因含有一个内含子,而在人类的约 20,000 个基因中平均含有 8 个内含子。有趣的是,大量的生化和结构研究表明,剪接体的整体组织和剪接催化核的结构在人类和酵母之间是非常保守的。因此,在高等真核生物中大量的剪接事件对剪接体的操作能力提出了挑战,但确切的潜在机制尚不清楚。
剪接体是一种在 pre-mRNA 上动态重新形成的蛋白质协调核酶,涉及 5 种保守的小核 RNA (snRNA):U1, U2, U4, U5 和 U6,具有多种蛋白质。snRNA 催化 pre-mRNA 剪接,而 U6 位于剪接体的催化核心。U6 的内部茎环 (internal stem-loop, ISL) 是剪接催化中心的主要组成部分。在 pre-mRNA 剪接过程中,催化核的核苷酸与两个催化金属离子螯合以完成分支和外显子连接。
RNA 修饰在各种生物事件中起着关键的调节作用。在高等真核生物中,U6 在转录后被大量修饰,在多个位点检测到假尿嘧啶 (ψ) 和 2'-O-甲基化 (Nm),并检测到两个单独的 N6 -甲基腺苷 (m6A,人类 U6 的核苷 43) 和 N2-甲基鸟苷 (m2 G,人类 U6 的核苷 72)。U6 的 ψ 和 Nm 主要分别由 Box C/D snoRNP (dyskerin) 和 Box H/ACA snoRNP (fibrarin) 引入,可能增加了 U6 中的碱基堆叠和碱基配对。最近,发现 U6 m6A 被 METTL16 甲基化,对识别 5 ' 剪接位点 (5 ' s) 至关重要。然而,唯一的另一个碱基甲基化 (m2 G72) 的作用仍然难以捉摸。

文章模式图(图源自Nucleic Acids Research )
G72 是一个保守的催化活性位点,存在于从酵母 (G78) 到人类的各种生物中。人类主剪接体的结构表明,ISL 的 G72(酵母中的 G78) 参与剪接体活化催化中心的形成,并直接与催化金属离子 M1 结合。在剪接催化的双金属离子模型中,人 U6-G72、-U74 和 pre-mRNA 提供 Sp 磷酸氧结合两个金属离子,与 5 ' ss 鸟苷的磷酸结合去除内含子。在一些哺乳动物的 U6 序列中,可以鉴定出 G72 上的 m2 G 修饰。尽管这种修饰在 40 年前首次被发现,但其对前 mRNA 剪接的影响及其生理作用仍不清楚。
本研究表明,m2 G72 存在于斑马鱼、小鼠和人类的 U6 中,但不存在于 U6atac 中 (U6 在次要剪接体中的功能类似物)。利用反向遗传学方法结合 RNA-质谱法,该研究发现 THUMP 结构域蛋白 2 (THUMPD2) 是负责修饰的甲基转移酶。THUMPD2 与一个辅助蛋白,一个多功能甲基转移酶亚基 TRM112 样蛋白 (TRMT112) 相互作用,催化 U6 m2 G72。体外 pre-mRNA 剪接实验表明,U6 m2 G72 缺失降低了剪接体的剪接活性。THUMPD2 的缺失导致数千个选择性剪接 (AS) 事件的改变,并上调无义介导的 mRNA 衰变 (NMD) 途径。最近的全基因组关联研究 (GWAS) 发现了与年龄相关性黄斑变性 (AMD) 相关的 THUMPD2 基因变异。本研究发现,约 50 个已报道的 AMD 相关基因和另外 30 个具有视网膜特异性功能的基因的 pre-mRNA 是 THUMPD2 介导的剪接调控的直接靶点,提示 THUMPD2 在 AMD 发病机制中的作用。
参考消息:https://academic.oup.com/nar/advance-article/doi/10.1093/nar/gkad1243/7504875?login=false

编辑: 王凯

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