学弟
师兄救命！我做流式为什么总是出现非特异性 Fc 结合的问题呀！而且我发现多色流式的时候，串联染料补偿怎么调都调不好，除了需要多种染料搭配，抗体还得每次都验证，染料又要超亮，多色流式配色选择染料真是挑战。真是头疼！
多色流式的确容易遇到这些问题，你可以注意这三点：
1、尽量避开会出现非特异性染色和易降解的串联偶联抗体，如 PE-Cy7，PE-Cy5，PE-Dazzle594，APC-Cy7，APC-Fire740；
2、尽量选择单激光激发的染料来减少光谱重叠；
3、依据抗原密度来搭配合适染料。
大师兄
虽然令人头疼的流式配色可以靠摸爬滚打探索出最佳组合，但如果有一款高亮、窄激发、批次间重复性好、兼容性高还可以 DIY 的「标签高亮 StarBright 染料」，可以一次性解决所有问题岂不是更有性价比？！
福利来了！伯乐 StarBright Dyes labeled streptavidin，不仅有助于多重 panel 设计，还有助于获得高质量的流式数据！现在识别下方二维码，填写申请将有机会获得 StarBright Dyes labeled streptavidin 新品试用机会！快来试试吧！
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星光染料，闪耀流式之美
StarBright Dyes 星光染料是 Bio-Rad 专有的荧光纳米颗粒，这种高亮染料使稀有细胞系和低密度抗原易于分辨且无需特殊染色缓冲液，可与所有仪器和试剂兼容，具有适用于任何多色实验的灵活性。此外星光染料激发和发射波段窄、稳定性和批间重现性好。
提高亮度
能够轻松分离稀有和低抗原密度的群体
Fig. 1. StarBright Dyes are brighter than competitor dyes.Human peripheral blood stained with CD4 conjugated to Pacific Blue, SuperBright436, and StarBright Violet 440 Dye.
窄激发/发射
通过缩小发射光谱和最小化激发光谱，StarBright 染料显著减少了溢出和扩散误差
Fig. 2. Excitation and Emission of SBV515.
广泛的仪器兼容性
与 Bio-Rad 的 ZE5 细胞分析仪、S3e 细胞分选仪和其他供应商的流式细胞仪兼容。光谱流式细胞术的理想选择。
Fig. 3. StarBright Dyes can be used in spectral flow cytometry. A, full spectral profileof SBV610 and SBV515. B, staining of human peripheral blood with CD8 SBV610and CD4 SBV515 to show helper and cytotoxic T cells.
缓冲液兼容性
不需要特殊的缓冲液，因此不需修改您当前的实验程序。在一系列常见的染色缓冲液中进行测试，性能不会下降，这与某些染料的细胞百分比明显较低且需要特殊缓冲液不同，StarBright 染料也可以在不降低亮度的情况下固定。
Fig. 4. Buffer compatibility. Human peripheral blood was stained for CD14SBV440 in various buffers. No change in performance was observed regardless of the buffer. Samples could be fixed with no drop in brightness.
缓冲液兼容性
显示与其他染料相容，包括 StarBright 家族的染料 。
Fig.5. StarBright Dyes can be multiplexed without special buffers. Human peripheral blood was stained with CD14 PE-A750,CD19 SBV670,CD3 SBB700, CD8 SBV610,CD4SBV515, CD127 A647, and CD25 SBV440 in 1% BSA in PBS to reveal monocytes,B cells,and cytotoxic,helper, and regulatory T cells.
一致的染色
久经考验的实验：包括多个批次，所有批次均独立偶联，并与加速保质期研究一起进行测试，表明 StarBright 染料具有可重复性和稳定性。
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星光染料与 Bio-Rad 高度验证的抗体相偶联，具有卓越的染色效果，是流式免疫分型理想的选择。
超多款产品，完美添加进任何已构建好的多色 panel！
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生物素（Biotin）-链霉亲和素（Streptavidin）系统好在哪里？
该系统具有许多特性和优势，不仅有助于多重 panel 设计，还有助于获得高质量的流式数据！更支持用户 DIY，打开您的流式配色脑洞！
* 当无法获得生物素偶联的靶标抗体，可使用简单的试剂盒（例如生物素（第 1 型）偶联试剂盒）来偶联纯化的抗体。如下图所示，使用该试剂盒偶联的抗体与商业生物素偶联抗体和直标抗体的染色相同。
在设计带有荧光标记链霉亲和素的生物素偶联抗体的流式实验时，需要注意：
1
进行抗体滴定：最佳做法是滴定抗体，以确定要使用的抗体和链霉亲和素的最佳浓度。从固定量的生物素偶联抗体开始，使用供应商推荐的量，然后滴定荧光标记的链霉亲和素。如果存在高非特异性染色，则使用已测定的荧光标记链霉亲和素的固定量滴定一抗。
2
增加封闭步骤：尽管链霉亲和素的非特异性染色可以忽略不计，但建议仍执行大多数染色方案中的抗体封闭步骤。这是由于存在可能与 Fc 受体非特异性结合的一抗。
3
优化预混抗体：链霉亲和素比率。使用预混复合物时，需要确定抗体与链霉亲和素的最佳摩尔比。初始检测的推荐比例为链霉亲和素 : 抗体为 3:1、1:1 和 1:3，因为这些比例涵盖了通常提供最高染色指数的比率。
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* BIO-RAD 是 BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。
*相关产品仅做科研使用，不做临床诊断。
*本产品试用活动最终解释权归伯乐生命医学产品(上海)有限公司。
内容策划：潘成
内容审核：李琳
图片来源：Bio-Rad
题图来源：Bio-Rad