qPCR 曲线杂乱、重复性差?你可能忽略了这些点(含福利)

2023-11-12 17:01 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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qPCR 实验忙活一周,一看曲线两眼「懵」,不是溶解曲线杂乱无章,就是扩增曲线飘忽不定,更糟糕的是 RNA 降解复孔重复性差CT 值异常等问题层出不穷…….饱经 qPCR 摧残的过来人表示,竹篮打水一场空的结局屡见不鲜。qPCR 问题千千万,不能一概而论,对症下药最重要!


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直播内容抢先看:



1. 如何设计「好」引物?qPCR引物设计原则及注意点:


引物设计跨内含子(防止非特异性扩增),注意不同转录本之间的差异,扩增效率在90~110%之间,引物特异性验证(Primer-Blast序列比对及溶解曲线分析);



2. CT 值异常分析:


Ct 值过大:可能是模板浓度低,扩增效率低或者体系存在 PCR 抑制物。应注意提高模板浓度,降低退火温度等优化反应程序。


Ct 值过低:可能是模板浓度高,引物设计不合适。因此应减少模板量或稀释 cDNA,优化程序避免非特异性扩增。



除了 CT 值异常、引物设计问题等,我们还常遇到 RNA 降解、曲线异常等各种问题!报名本次直播,带你从实验流程出发,聚焦 qPCR 疑难问题、实验技巧分享。现场还有一对一答疑、有机会赢取美的暖风机、膳魔师不锈钢真空保温杯、小米电吹风、不锈钢指甲套装、帆布包等 120 份好礼! 



内容策划:邹礼平
内容审核:钟可可

题图来源:图虫创意


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编辑: 王凯

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