单细胞测序技术是当下研究的一个大热门，不仅在顶尖实验室被广泛应用，就连在大家周围的实验室里，也有不少的研究者开始从单细胞入手，获得研究的进一步突破。眼瞅着别人重量级的成果一个接一个，论文一篇接一篇，自己却还在单细胞研究的门口打转：
「单细胞测序，听起来就高深玄虚，又是表又是图，看不懂」
「师兄最近在做了，和我讲了几遍原理，我连个大概都没听明白」
「导师安排我做单细胞测序，要开肝了，但是完全没有肝的思路啊」
「单细胞测序成本贵吗？我们组是真没钱了」
「都说好用好用，但是单细胞测序技术真的适合我的研究吗？」
针对以上问题，丁香园联合瑞沃德开展「单细胞测序全解析：从样本制备、单细胞捕获到文库构建」专题直播，将从单细胞测序技术的基础实操讲起，带大家快速入门上手！报名直播还可申请纳米磁珠细胞分选产品、单细胞悬液制备仪试用，还有蓝牙音响、精美帆布包、钥匙扣等礼品等你来拿～
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同时，课程实时答疑，现场为大家解惑。文内为大家整理了一些常见问题的 Q&A，希望能够解决大家的问题。
单细胞测序常见问题 Q&A
1，如何从零开始我的单细胞测序实验？好上手吗？
单细胞测序的流程包括：单细胞捕获——单细胞裂解——遗传物质的提取扩增——文库构建、测序与数据处理。相对于传统测序虽然更加复杂一点，但是单细胞测序也已经是一项很成熟的技术了。本次课程会为大家做一个单细胞测序的技术详解，在详细为大家拆解了各步骤的原理后，相信单细胞测序技术也不难上手。
2，单细胞悬液制作时，有哪些注意事项：
> 全程无菌操作
> 避开破溃、坏死、液化部位，以防污染
> 尽量去除混杂的结缔组织
> 血细胞/淋巴细胞等注意抗凝
> 血管处理
> 环境温度控制
> 新鲜组织样本建议立即处理，否则需置组织于保存液中，4 ℃ 保存，一般可以维持 72 h。
3，单细胞转录组和单细胞核转录组测序有什么差别？该如何进行选择
两者使用的场景不同，一般优先推荐单细胞转录组，如果样本是冷冻或者大粒径细胞 (直径 > 60 um) ，那就建议提取细胞核。与单细胞转录组相比，单细胞核转录组捕获到的基因总数比减少了约 20%~40%。但在细胞分群上两者数据具有可比性，单细胞核转录组测序具有维持细胞标志物的表达，更容易鉴定罕见细胞群，没有太多应激基因表达等优势，但是免疫细胞捕获灵敏度较低，不太适合进行免疫组库或者针对免疫细胞检测。
4，单细胞悬液制作时总是粘稠，具体是啥原因，该如何解决？
● 核酸外溢：大量细胞被裂解后释放大量 DNA，使得细胞聚集粘稠。解决方案：增加酶混合液中 Dnase 酶的浓度。
● 组织样本问题：较大的软质地肿瘤组织血管缠绕多。解决方案：降低裂红溶液浓度或者减少裂红时间；取材过程中，仔细剔除血管和残留的血块等杂质，反复漂洗干净肿瘤组织，处理干净非实质的粘膜等。
● 消化过度：消化时间过久/酶解试剂选择有误。解决方案：调整酶混合液浓度和酶解时间进行改善，适当考虑加入纯度更高杂质更少的酶
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更多内容报名直播观看，将为大家详细介绍技术的发展，并且会以具体的样本为例，把样本前处理、细胞捕获以及文库构建的内容一一详解，同时，课程实时答疑，现场为大家答疑解惑。单细胞，这次一定为你讲透！
内容策划：潘成
内容审核：朱晓芳
题图来源：图虫创意