小师妹的课题涉及到单细胞测序,可在平台选择上面确犯了难,不但要考虑样本量,还要确保样本包容性和兼容性以保证细胞活性,但是所有的都考虑进去,却被经费卡了脖子。
你是否也遇到了同款选择困难症:
单细胞测序究竟该先考虑通量、兼容还是预算?
让人挑花了眼的国内外高通量单细胞测序平台真实性能又是否能满足大家的需求?
科研工作者该如何选择才可以事半功倍?
接下来让我们理性对比,超多维度信息助你秒速选出最合适测序平台!
*以下测评结果来源于欧易生物对自身合作的多家单细胞测序平台在价格优势、细胞捕获、基因捕获、样本兼容、物种兼容五个维度进行分析测评出「时下/当下」最经典、最灵活、最兼容、超高性价比、最全面的特点结论,仅供参考,非商业广告。
1
10x Genomics—Chromium 平台
「最经典」的单细胞测序平台——大多数科研工作者首选
10X Genomics 单细胞转录组测序平台利用微流控、油滴包裹和 Barcode 标记等技术来实现高通量的细胞捕获技术,能够一次性分离、并标记 8,000~10,000 个单细胞,从而获得每个细胞 3’端的转录组信息。
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图片来源:10X genomics 官网
优势:
超高细胞通量:微流体「T 字形」系统为 8 通道系统,每个通道可捕获 10,000 细胞;
细胞捕获效率高:单个细胞捕获效率最高达 65%;
多胞率低:多细胞率(同一个 GEM 包含 2 个及 2 个以上细胞)低于 0.9%/1,000 细胞。
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10x Genomics—Chromium 平台评分
评价标准(1~5 分,下同):
价格优势:低;较低;中;较高;高
基因捕获:低;较低;中;较高;高
细胞捕获:低;较低;中;较高;高
样本兼容(数):新鲜、梯度冻存、-80 裸冻、液氮速冻、FFPE
物种兼容(数):人、小鼠、大鼠、其他真核生物、微生物
2
10x Genomics—Flex 平台
「最灵活」的单细胞测序平台——灵活解决样本储存、混样及 FFPE 样本测序问题
10x Genomics Single Cell Gene Expression FLEX 单细胞转录组测序技术(简称 FLEX),采用 4% 的多聚甲醛 (PFA)对细胞进行固定,一步锁定 RNA 表达状态,解决了样本储存、多样本批次处理、多时间点多组样本的混样等问题,同时解锁 FFPE 样本的单细胞转录组测序。建库时将样本与探针进行杂交,捕获基因用于制备单细胞测序文库并开展测序。
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来源:10X genomics 官网
优势:
FFPE 样本检测,打破仅新鲜样本进行单细胞转录组测序的局限性;
适合多时间点/多中心取样的样本,项目设计需考虑不同时间点/不同实验室取样;
单通道中最多混 16 个样品,单张芯片最多可混 128 个样本,最多可实现百万级别细胞通量。
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10x Genomics—Flex 平台评分
3
BD Rhapsody 平台
「最兼容」的单细胞测序平台——兼容低活性新鲜样本及表面蛋白测序
BD Rhapsody 利用微孔进行单细胞分离,其利用铺满 20 万个直径 50 μm 微孔的微孔板和携带细胞标签的直径为 35 μm 磁性 beads 捕获细胞。利用磁铁回收 beads 到单管中进行后续逆转录、建库等操作。
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图片来源:BD biosciences
优势:
对细胞悬液的宽容度高:BD Rhapsody 可以应对 65% 细胞活率的样本;
进程可控:BD 配套开发的 BD Rhapsody™ 扫描仪可以有效帮助实验人员观察每一步操作时微孔板中的状态,随时决定是否终止实验;
捕获率高:细胞捕获率高达 80%,远超市面上其他单细胞平台;
兼容 CITE-seq 和 cell hashing:AbSeq kit 可以同时进行单细胞蛋白和转录组联合检测。
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BD 平台评分
4
墨卓生物—MobiNova-100
「超高性价比」的单细胞测序平台——超高的数据质量及超低的价格
墨卓 MobiNova-100 单细胞测序建库系统,采用分子标签的单细胞识别,利用独家专利的标签和油包水技术,通过优化微流控芯片的设计和仪器控制,在液滴生成时稳定实现细胞分离和微球、试剂、细胞的共包裹达到较高的细胞捕获率。
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图片来源:墨卓生物
优势:
一体化:完整的自动化流程,一步操作实现从单细胞捕获、制备到核酸样本的获取;
适用范围广:精确分析单细胞间的基因表达谱差异,并可扩展到全转录组及多组学研究;
数据质量高 :全自动系统,大大降低了实验误差,保证了数据的准确性。
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墨卓—MobiNova 100 平台评分
5
M20—M20 Genomics
「最全面」的单细胞测序平台——覆盖全物种及全样本类型
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图片来源:M20 Genomics
M20 Genomics 基于微流控技术,完全自主设计的单细胞平台突破了单细胞测序技术对冻存或 FFPE 固定组织无法进行有效检测的瓶颈,实现了高通量单细胞 RNA 的全长覆盖读取;同时,M20 Genomics 是国内首款针对细菌的高通量单细胞 RNA 测序平台,其检测过大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌等多种类型的细菌,大部分样本的单个细菌中可以检测到上千个基因,助力细菌新的耐药和持留机制的研究发现。
优势:
覆盖 mRNA 全长的转录组测序;
全样本类型:不仅可用于新鲜组织、冻存组织,还可以解决 FFPE 样本难以进行单细胞转录组测序的难题;
高灵敏度:M20 Seq 在部分样本上大幅度提高了单细胞测序的基因检出数;
全物种覆盖:无论是细菌等原核生物细胞,还是人类、动物、植物等真核生物细胞,都可以通过 M20 Seq 进行测序。
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M20 Seq 平台评分
纵观 5 个单细胞测序平台,他们在价格优势、细胞捕获、基因捕获、样本兼容、物种兼容五大方便各有优劣,平台间的比较数据如下:
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*各项指标代表该平台的整体水平,不针对特定的样本类型;
*该评价指标不代表业内共识,仅为欧易生物按平台五维度初步评估得出,供大家参考,解释权归欧易生物所有
写在最后
相信看到这里,许多人对自己想要选择的测序平台已经有了答案,高效稳定的仪器性能、合理的性价比是科研工作者选择测序平台的首要因素,但是样本类型、物种匹配度也是需要考虑的同等重要的因素,合理的实验设计搭配好自身需求才能选择出最能满足实验需求的测序平台。
欧易生物自 2018 年正式推出单细胞测序服务以来,陆续与 10x Genomics、BD、墨卓生物、M20 Genomics、华大时空等优秀的国内外单细胞平台建立良好的生态合作关系,经过 5 年+ 的飞速发展,已助力用户发表单细胞文章近 180 篇,累计 IF 2,000+。
说明:以上内容来自欧易生物技术支持团队整理
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内容审核:潘成
项目审核:周育红
题图来源:图虫创意