这是我做流式实验最可怕的场景
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检测单一指标，买了一个跟流式细胞仪通道不适配的抗体，还给弱抗原搭配弱荧光抗体，结果数据没法用，没少挨骂
；指标多了，多色搭配手忙脚乱，串光不会调补偿，用串联抗体结果「固定」步骤抗体降解了……
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想知道流式高手都是怎么一步步学习多色搭配的吗？走完以下 4 个阶段，保你多色流式的数据直出即可发表！
第一阶段：提前看清仪器信息，再也不做无用功
提前查询流式细胞仪的通道信息，确认可以选择的荧光染料后，再查询荧光染料信息，确认这些荧光素的激发波长和发射波长、接收该荧光的滤光片等信息，是否和流式细胞仪的通道一致。多色流式尽量选用多激光激发，充分利用仪器允许的全部荧光染料。
第二阶段：端水艺术家之让各色荧光和谐共处
配色时要选择干扰少的荧光组合，尽量避免有发射光谱重叠，尽管设置单阳对照可以调节补偿，但补偿值越大信号分辨率降低越厉害，所以尽量选择光谱重叠度小的荧光染料，如 FITC/PE-Cy7，并且选择不同激光激发的荧光染料，如 FITC/APC，PE/APC。
第三阶段：「弱弱抱团取暖」NO，「强弱合理搭配」YES！
流式配色基本原则需要「强弱搭配」，通过提前了解检测指标表达量的强弱，来搭配荧光素的弱强。常见的荧光染料的强度为 PE > APC > FITC > PerCP。强表达的抗原，强、弱荧光素都可以选择，弱表达抗原，一定要选择强荧光素。
第四阶段：抗体格外娇气？染料特殊性要知道
串联荧光染料容易降解为原来的两个染料，从而出现对应两个通道的假阳性，如选用了串联染料，需注意光照、固定步骤和孵育时长对串联荧光素造成的降解影响。并且直标的流式抗体应该 4 ℃ 避光保存，反复冻融会使得抗体与荧光染料断裂影响使用。
另外还有一些流式抗体的注意事项请查收：
● 建议实验细胞的数量和抗体的比例要适当，有条件需要对抗体量进行滴定。
● 尽量选择经实验验证的流式抗体，以保证实验结果。
● 实在不会进行配色也不要胡乱搭配盲目尝试，可借助工具辅助设计，如美天旎官网的【Antibody panel builder】。
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内容策划：王丹琦
内容审核：周育红
题图来源：自己做的
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