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@ 明天就去庙里上香
PCR 是彻头彻尾的玄学吧！能不能 P 出来全部看命？前几天能 P 出来的东西今天用同样的引物、模板、同样的枪和耗材，甚至连 PCR 仪里的位置都一样就 P 不出来了？PS：为什么没记下当时用的哪盒枪头！
@ 实验室打螺丝
@ 热衷排队
作为实验室的打工人，在面对最熟悉、最基础的 PCR 时也常常会陷入以下苦恼：
➢ 在 P 出和没 P 出之间随机跳跃
➢ 在无效优化 PCR 体系的过程中疯狂内耗
➢ 在苦等实验室仅有 PCR 仪中起早贪黑
想要做一次完美的 PCR 实验，不仅需要高质量的模板、引物和酶，一个控温准确超靠谱、功能完备、操作方便的 PCR 仪也必不可少。
赛默飞新上市的国产 MiniAmp Plus PCR 仪也许就是你要找的小可爱！为了更好地满足您的实验需求，我们准备了 2 分钟的简单有奖调研，现点击「阅读原文」或扫描下方二维码，完成调研即可参与抽奖赢摩飞榨汁杯、幻响护眼台灯、晴雨伞、绿联 USB 扩展器等 100 份好礼。
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注：如发现问卷信息乱填或信息有误，则默认放弃礼品，8 月 20 日活动结束后 15 个工作日内安排寄送礼品。
为了帮助大家通关 PCR，我们也为大家整理了以下知识点供大家学习：
3 个 PCR 常见难题与解决 Tips
常见问题一 非特异性扩增/条带模糊
可能原因： 变性不充分；退火温度过低；退火时间过长
解决方案：如果模板是富含 GC 和具有二级结构的序列时，可适当增加变性时间和温度，使 DNA 有效解离。此外，也可以升高退火温度，提高特异性。
最佳退火温度通常比引物 Tm 低 3~5°C，并参考所用 DNA 聚合酶的推荐退火温度。
预实验推荐使用梯度 PCR 仪，以 1~2°C 增量逐步优化退火温度。MiniAmp Plus PCR 仪采用 Applied Biosystems PCR 仪专利的 VeriFlex 模块可精确设置分区温度，真正做到 PCR 梯度优化精确控温。此外，对于长片段 PCR，还可以尝试将延伸温度降低，延伸时间延长来进行优化。
常见问题二 PCR 扩增序列错误
可能原因：DNA 聚合酶的保真度较低；Mg2+浓度过高；循环数过多
解决方案：可以选用高保真度的 DNA 聚合酶。如：Invitrogen Platinum SuperFi II DNA 聚合酶（货号：12361010），其保真度高出一般 Taq 酶 300 倍以上，能出色的完成任何对保真度有特殊要求的扩增；其次，实验中按需降低 Mg2+ 浓度可以减少扩增序列错误。
此外，在确保不明显降低目标 PCR 产物的得率时，适当减少循环数。循环数过多可能会增加错配核苷酸的掺入。可以适当增加 DNA 起始量，避免运行过多的循环数。
常见问题三 长片段扩增困难
可能原因：所用 DNA 聚合酶不合适；引物用量不足；延伸温度偏高
解决方案：可以适当增加延伸时间。如果是扩增大于 5kb 的 DNA 片段，请注意所选 DNA 聚合酶是否具有长片段扩增能力和合成能力，建议使用专为长片段 PCR 设计的 DNA 聚合酶。如：Platinum SuperFi II DNA 聚合酶（货号：12361010），比较适用于难扩增的靶标，对大于 20kb 的长片段也有很强的扩增能力；
引物用量不足也会导致长片段扩增不出来，可以在最小起始浓度为 0.5 μM，进一步提升引物浓度；
此外，降低延伸温度（如降至 68℃），可以促进引物结合和提高酶热稳定性，提高长片段扩增成功率。
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通过以上常见问题分析以及解决方案我们可以看到，很多令人头疼 PCR 问题都与退火温度、循环时长有关。
30 多年来，Applied Biosystems™ PCR 仪以其控温准确, 界面友好的特点，在全球受到无数科学家青睐。MiniAmp Plus PCR 仪是赛默飞首款国内生产的梯度 PCR 仪，秉承一贯的可靠、控温准确、界面友好的特点，充分满足各位科研用户对采购国产高性能 PCR 仪的需求。
优点多，很靠谱！
o 体积小巧，同样空间可放置更多
实验室台面拥挤没有位置？不必担心，只有 19 厘米宽的机身可以随意放置。麻雀虽小，五脏俱全，可以满足日常 PCR 的所有功能。前后排风设计，在有限的实验空间可以并排放置更多台 PCR 仪，告别排队等待的苦恼。
o 不担心控温模块表里不一，分区精准控温，高效省时
沿用 Applied Biosystems PCR 仪一贯标准，温度校验标准可追溯至美国国家标准与技术研究院（NIST），实现准确控温，稳定可靠。
如果您正在优化 PCR 反应，使用 Applied Biosystems VeriFlex 加热模块可以提供更加精确的温度控制，可以更好地确定最佳退火温度。相比传统梯度 PCR 的方法，这种方法可以更准确地确定最佳退火温度，从而节省实验时间。
MiniAmp Plus 加热模块具有 3 个独立的温控区域，您可以同时运行 3 个不同的退火温度，以便在一次实验中确定最佳退火温度，这可以更加高效地优化 PCR 反应。
与传统梯度 PCR 不同，MiniAmp Plus 可独立控制 VeriFlex 加热模块和非 VeriFlex 加热模块运行的变温速率，这使得您可以根据需要调整变温速率，以确保最佳退火温度的精准性。
o 不用担心不会操作，上手超简单
采用灵敏的彩色触摸屏和导航式按钮，即使对于新手，您也可以轻松设置 PCR 程序或管理仪器。此外，我们还贴心提供详细操作说明书与操作指导视频，分分钟上手，无需恳求师兄师姐帮忙。
o 内置模拟模式，实现新旧平稳过渡
此功能可模拟 Applied Biosystems 2720，Bio-Rad T100，MJ Research PTC-200，Takara Dice，博日 XP 等其他型号的热学性能，大大节省程序优化所需时间，无需担心仪器更换影响实验进度。
o 功能完备， 解决后顾之忧
● 多重权限账户管理模式， 不用担心程序被其他人修改或删除；
● 内置 AutoDelta 选项，设置温度或时间随循环递增或递减，用于 Touchdown PCR 或 Long PCR；
● 高通量联机操控：无需购买软件，允许多台机器在同一局域网内相互连接，并设置由其中一台来操控，可用于通量扩展；
● 具有程序覆盖保护功能、自动断电重启、自动休眠、热盖可关闭或调整温度、仪器自检功能、查看运行日志并导出或打印、内置程序模板等功能等。
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有此神器在手，何患拿不下 PCR？快快抓紧完成 2 分钟简单调研，即有机会获得摩飞榨汁杯、幻响护眼台灯、晴雨伞、绿联 USB 扩展器等 100 份精美礼品！
内容策划：潘成
内容审核：吴军
图片来源：赛默飞
题图来源：视觉中国
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