还拿不下 WB ELISA?试试这 15 个蛋白实验小技巧

2023-08-05 22:35 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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蛋白实验是基础科学研究的重中之重。从 WB 到 ELISA 再到 CHIP,每一个实验都有很多操作细节。
  • 如何配制出又直又好看的 wb 胶板?

  • Co-IP 背景较深或者条带杂乱的可能原因是什么?

  • Elisa 实验中怎么选择抗体?


本次文章,我们汇总了 20 个蛋白实验常见问题,一定可以解决你的困扰。
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「进阶」

WB 实验注意事项



问题 1 :做 wb 实验时,样本如何精准上样?


  • 提取时冰上操作,buffer 添加蛋白酶抑制剂;

  • 蛋白尽量同一批次提取、测定浓度,保存及使用情况尽量一致,防止部分样品有降解;

  • 蛋白提取后尽快测定浓度,添加标曲;

  • 最好调整为统一浓度后上样体积保持一致;

  • 每孔上样体积不宜过大或过少,不超过最大上样量,避免样品溢散污染;

  • 由于样品有一定粘滞性,枪头吸液后外壁会黏附一些,加样时需注意,使用长而细的枪头;

  • 相比等体积上样,如果可以,尽可能等蛋白量上样。



问题 2 :做 wb 实验时,内参不齐的改善方法?


  • 选择特异性高、表达量适中的内参蛋白;

  • 调整待测蛋白质的负载量;

  • 尽可能选择使用相同的技术参数,减少技术差异导致的内参不齐。



问题 3 👉怎么配置又直又好看的 WB 胶?


问题 4 👉WB 小分析蛋白如何跑?


问题 5 👉 怎么选择 ELISA 抗体?


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编辑: 王凯

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