晕!还有人不会用 Trizol 同时提 RNA 和蛋白吗?

2023-07-29 22:01 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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一招提效!

同时提 RNA DNA 蛋白质


TRIzol 试剂适用于从细胞和组织中快速分离 RNA。最大特点是可同时分离一个样品的 RNA、DNA、蛋白质。

提取的 RNA 无蛋白质和 DNA 污染,可用于 Northern Blot,dot blot,ployA 筛选,体外翻译,RNase 保护分析和分子克隆。DNA 可用作标准,比较不同样品 RNA 的得率,也可用于 PCR 和酶切。蛋白质可用于 Western Blotting。

师弟

师兄,这也太省时间和样本了吧!那得到的样本浓度有保障吗?

如果想拿到高浓度样本,需要按照以下 3 步进行优化,快做好笔记!

师兄


3 步排查!

提升样本浓度


1、RNA 浓度低排查 list
一般有以下几种可能:① 样品裂解或匀浆处理不彻底;② RNA 沉淀未完全溶解;③ 样品匀浆时加的试剂量太少;④ 匀浆样品时未在室温放置 5 分钟;⑤ 吸取水相时混入了有机相;⑥ RNA 沉淀未完全溶解。逐个排查,提升样本浓度。
更多 RNA 提取问题可查看 RNA 提取与检测专题,搞定全部细节问题。





2、DNA 浓度低排查 list
可能是:① 样品匀浆和裂解的不彻底;② 最终得到的 DNA 沉淀没有完全溶解;③ 酚除去的不彻底;④ DNA 出现降解;⑤ RNA 污染 DNA。
更多 DNA 提取问题可查看 DNA 基础知识专题,搞定全部细节问题。


3、蛋白质浓度低排查 list
一般包括:① 样品裂解或匀浆处理不彻底;② 最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解;③ 也有蛋白质出现降解的可能。
更多蛋白质提取问题可查看 WB 专题,搞定全部细节问题。

以上就是 DNA/RNA 和蛋白,同时提取的实验 protocol,以及提升各自浓度的小技巧,省样本浓度高!


更多实验问题

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编辑: 王凯

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