｜师兄，我的细胞漂了
｜师兄！我的细胞形状怪怪的
｜师兄？我的细胞里怎么有小黑点？
细胞间的操作台并不是一个细菌都没有，所以在操作的时候还是要尽量规范迅速地完成操作，尽量减少进入培养体系的细菌数量。
先检查一下自己的实验步骤是否规范：
👉 点此查看贴壁细胞培养 protocol👉 点此查看悬浮细胞培养 protocol👉 点此查看传代细胞培养 protocol👉 点此查看初代细胞培养 protocol
但不一定所有的「状态差、有黑点、形状怪」都是污染。如果细胞形态异常，不要慌，先拍个照鉴定一下！
怎么确定细胞是否被污染？关于如何鉴定正在培养的细胞有无污染，很多新手朋友没缺少经验，在此师兄分享下自己的经验。
第一步——看细胞，用肉眼观察。
先看细胞瓶身，如果瓶身上没有裂缝，正常；如果瓶身上有裂缝，则污染几率非常大。
再看培养基颜色，如果培养基颜色是红色或者粉色，正常；如果是橙色，则可能是污染或者细胞过密；如果是黄色，则污染几率非常非常大。
最后，如果培养基澄清，正常；如果有少许漂浮物，则可能是污染或者有细胞凋亡；如果培养基很浑浊，甚至出现絮状物，则污染几率非常大。
第二步——静置细胞 1～2 h，使用显微镜观察。
菌类污染通常分为杆菌、球菌和霉菌，为了方便大家分辨，师兄特地找了之前收到有典型污染的细胞照片，希望能帮助大家判断。
以上污染菌类为杆菌常见的有大肠杆菌， 2-5 um 左右👉 点此进入细胞污染专题
以上污染菌类为球菌常见的有葡萄球菌，直径通常在 1～2 um 左右👉 点此进入细胞污染专题
以上污染菌类为霉菌常见的有毛霉，菌丝宽 2～10um左右👉 点此进入细胞污染专题
需要提醒的是，因为运输过程中细胞离开了其正常生长所需要的环境，部分细胞会出现凋亡或产生细胞碎片，容易误认为是细菌污染。
另外培养基中的杂质纤维也容易误认为是霉菌污染，具体区分方法如下：
细胞碎片&杆菌
细胞碎片只会随着细胞状态的变差而变多，通常增长不快；杆菌则增殖非常快，以常见的大肠杆菌为例，常温 25℃ 增殖 1 倍需要 40min 左右（此数据可查阅相关文献验证），培养基很快变黄且浑浊。
凋亡细胞&球菌
凋亡细胞通常只比正常细胞小一点，只会随着细胞状态的变差而变多，通常增长不快；球菌则要小很多，且成串或成团，培养基很快变黄且浑浊。
杂质纤维&霉菌
杂质纤维通常是过滤时残留的滤纸纤维，或者是酒精棉球上的棉纤维，在不开瓶处理的情况下其数量不会增长；霉菌的话虽然增殖速度没有杆菌和球菌快，但还是会有明显增殖。
👇 关注细胞污染专题，防止污染！
细胞被污染还能洗洗重新用吗？
扔掉吧！
一般处理细菌污染的重要原则是——无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量。
当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，还是建议你把污染的扔掉，再复苏新细胞，以免影响实验数据，干扰判断。
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