4 个步骤带你拿捏流式细胞术!(超全汇总)

2023-06-26 20:32 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:丁香实验
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很多同学做流式细胞实验,还有一些问题:


如何进行实验设计?细胞悬液样本怎么制备?流式细胞仪器怎么使用?如何分析流式检测的结果图?


今天就给大家总结了一波从「实验设计」到「结果分析」的全流程 protocol,以下内容来自丁香实验「流式细胞术」,超全 protocol 不断更新,建议点击收藏!


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第一步设计你的流式细胞实验
很多同学在实验设计的时候就埋下了隐患,最常见的问题就是——对照设置不合理,最后导致整体实验失败或数据不理想。
流式对照至少有 5 种。
生物学对照,空白对照,同型对照(Isotype control),补偿对照(也叫单阳性对照)和 FMO 对照,主要目的是为了避免出现的假阳性或假阴性结果。
看不懂以上对照的含义也没关系,我们以一个具体的凋亡实验来看看如何设置对照组:👉 点此查看对照组设置具体案例!

第二步
细胞悬液样本制备
流式细胞术的分析检测建立在单个细胞的基础上,所以制备合格的单个分散的细胞悬液是非常关键的一环。
对不同来源和不同形式的样品,根据各种样品的特点可选择不同的分散方法。
单层培养细胞、血液、各种脱落细胞等样品
标本经过简单的制备悬液,离心分离处理,就可以得到分散较好的单个细胞悬液,是理想的流式细胞术检测对象。
不同组织来源的实体组织标本
采用酶消化法、机械法和化学试剂处理法来分散细胞。
石蜡包埋组织单细胞悬液
可使大量存档的临床资料重新得到研究与利用,从而扩大了流式细胞术的应用范围。样品制备一般通过切片、脱脂、水化、消化及终止消化后过滤再收集细胞悬液,去除碎片的单细胞悬液用 70% 乙醇固定保存。👉点此查看流式细胞样本制备 protocol

第三步流式检测操作流程
很多同学第一次操作流式细胞仪器的时候非常紧张,生怕哪一步做错,弄坏了上百万的实验设备。仪器的操作确实有很多讲究,比如:
「检查供液槽和废液槽:供液槽应含足够的仪器缓冲液,废液槽应在上次使用后清洗干净。」
流式细胞仪器使用方法和流程已帮大家做好梳理:👉点此查看流式细胞仪使用操作

第四步
流式检测结果分析
实验结果图通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种。
由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。不过很多新同学很难读懂图片代表的含义。

想要了解「Gate」和 「Regin」?流式图中的阴/阳(N/P)如何划分?坐标轴的意义?二维图怎么看?等等问题。
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如果你是实验小白可以收藏、转发文章,在做实验的时候按照以上流程一步步操作。如果你是师兄师姐,也可以把本篇文章分享给师弟师妹们!
最后看看「流式细胞术」专题内还有哪些内容?
👉流式细胞术的应用及技巧👉组织(肺、脾脏)流式细胞术前处理👉26 个流式细胞术常见问题问答,经典!👉荧光标记法(流式细胞仪标本制备)👉流式细胞表面染色
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编辑: 王凯

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