免疫染色虽然原理简单，但步骤复杂，经常忙活一整天，结果却不尽人意：切片出现脱片、染色结果为阴性、组织切片出现非特异性染色、染色背景过强、切片染色不均匀、拍照啥也看不见……
但其实我们在进行问题原因排查时，按照样本制备、抗原修复、抗体检测、成像四步走，就可以排除大部分问题！按照下面的自查表来看看你的 IHC 结果不满意是不是因为没注意这些点吧！
样本制备
无染色或染色弱
切片是否过于成旧？玻片上的组织是否已干化？脱蜡是否正常？
高背景值
洗涤与固定是否充分？组织是否有人为或试剂损伤？检测试剂是否渗透完全？
抗原修复
无染色或染色弱
固定步骤引起的抗原交联导致未被修复
抗体结合
无染色或染色弱
一抗二抗是否失活？一抗是否为同种型且适用 IHC 应用？抗体稀释度是否合适？二抗是否浓度过高或无法提供足够的信号放大？
组织内目标蛋白丰度低或没有？目标蛋白是否为无法检测的核蛋白？
高背景值
一抗二抗是否有非特异结合？是否使用了同一物种的抗体？是否有多克隆抗体或者抗体浓度导致的非特异结合?
孵育温度是否过高？底物浓度过高？
成像
无图像
染色步骤是否确认无无误？
光源是否设置正确？是否正确聚焦？滤光片是否正确调整？
图像不正常
物镜是否干净？图像是否存在光学像差？样品中是否有发射光谱重叠？封闭剂和色原与盖玻片是否兼容？
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不难看出，在 IHC 实验中选对抗体实验就成功了一半！除去 IHC，还有一系列实验中抗体是影响成败的关键因素！
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为什么抗体的批次稳定性难以维持一致？默克抗体又有哪些优势？
原因要追溯到传统抗体生产技术的原理，抗体储存条件不当或者抗体靶标复杂异常都会导致抗体的特异性差，但抗体结合特性同样受到生产和纯化工艺相关的许多因素制约。想知道有哪些因素导致抗体不稳定，需要先了解各类抗体的生产过程和作用模式。
多克隆抗体的生产
多克隆抗体直接从通过免疫动物后的血清中产生和分离，流程相对简单，速度快且成本低。多抗可以识别抗原的多个表位，灵敏度更高。多抗无表位被掩盖的顾虑，在检测翻译后修饰或结构异质化蛋白时具有一定优势。
大多数多抗产自于兔子体内，是因为兔物种对抗原的免疫反应较强。然而，多抗有时会引入较高的背景信号，不同制备批次间易存在差异，导致实验结果不可重复。
单克隆抗体
杂交瘤技术将宿主免疫产生的 B 细胞与永生骨髓瘤细胞融合，筛选获得的杂交瘤细胞能够在培养中持续生长，表达对抗原单一表位具有特异性的抗体，并在一定时间内保持抗体的稳定性能。适合于特定结构域或特定修饰的特异性检测
大多数单抗产自于小鼠体内，是因为小鼠物种免疫的特异性较强。然而杂交瘤细胞系在经过长期培养后，可能出现细胞系漂移或返祖现象，不分泌特异抗体或者抗体效价降低。
既然兔多抗和鼠单抗各有各的优点，有没有一种抗体可以集合二者优点，又摒弃二者的缺点呢？我们全都要！
重组抗体
通过基因克隆技术，将携带抗体基因序列的载体引入表达宿主（如细菌、酵母或哺乳动物）中，用于生产高质量的功能性抗体。
重组抗体性能稳定，几乎没有批间差异，并且生产过程不需要动物，既避免动物病原体污染，也减少了对动物的伤害。
重组抗体技术平台，ZooMAb® 重组单克隆抗体平台，荣获 2020 年度 CiteAb 创新产品奖
技术革新：新一代 B 细胞克隆技术
ZooMAb® 重组抗体平台基于独有的专利技术，从免疫宿主的外周血单核细胞中分离大量 B 细胞并永生化，效率可达 80～90%，因此可以获得大量阳性克隆，并赢得足够的时间来进行筛选与鉴定，获得兼具高灵敏度、高特异性、高批间稳定性的优质抗体。
工艺升级：冻干粉
ZooMAb® 抗体经过浓度预校准，每支抗体的浓度相同，确保实验方案的稳定性。ZooMAb® 抗体以冻干粉形式提供，可在环境温度下进行运输，不需要干冰和低温冰箱。冻干粉抗体储存于 1.6 ml 管中，管盖包含防蒸汽的 O 形环，密封效果好，可长期稳定保存。
应用验证：至少 3 种
通过多重筛选获得高亲和力、高特异性的克隆，同时每种抗体至少经过 3 种以上常见应用验证，如 WB，IHC，IF，ELSIA 等，一支优质抗体解决多种应用需求。
成本降低：性价比高
ZooMAb® 抗体利用重组表达技术生产，生产成本相较免疫动物纯化抗体低，且产量稳定可靠。是市面上性价比相对高的抗体生产平台。
内容策划：潘成
内容审核：邱天天
图片来源：默克生命科学
题图来源：视觉中国
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