酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。
ELISA实验生物灵敏度高，特异性强，安全可靠，是免疫学中的经典实验，丁香实验在这里为大家准备了ELISA操作详解，速戳视频学习吧！
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实验原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
首先利用样品中的待检物质与固定的抗体或抗原结合。洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。
再通过加入与酶反应的底物显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析。
ELISA实验用到的实验试剂众多，按照实验要求准备所需的试剂是实验成功的第一步，这里丁香实验为大家准备了试剂清单，供大家参考：👉👉👉
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ELISA的分类
常用的ELISA可分为五大类：①直接ELISA；②间接ELISA；③夹心ELISA；④竞争ELISA；⑤竞争抑制ELISA。
实际上，不管是哪一种ELISA，操作方法都离不开：①将抗原或抗体吸附到固相载体上；②加入待检样品以及后续试剂；③温育；④洗涤去掉游离未结合的反应物；⑤加入酶检测底物；⑥结果的判读。
方法图解
1. 双抗体夹心法测抗原：针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体。
此法也是ELISA实验中最常用的方法，戳链接进行学习：👉👉👉
2. 竞争法测抗原：两组底物降解量之差，即为所要测定的未知抗原的量。此方法测定的抗原只要有一个结合部位即可，对小分子抗原测定常用。
对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用竞争法，具体步骤进入小程序学习：👇 👇 👇
3. 免疫抑制法测抗原：被检标本对底物显色的抑制程度与标本中所含抗原的量成正比，二者之差即为预测抗原的量。
4. 间接法测抗原：利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体。
更多操作步骤详解点击链接学习：👇 👇 👇
不同的方法除了操作步骤的差异外，更多的是为实现不同的实验目的，因此各位科研er们要贴合自身需要进行选择，更多关于方法的比较可以在丁香实验小程序进行查询。👇 👇 👇
常见问题
ELISA实验对初学者而言，如不注意实验操作过程中的各个环节，可能会出现白板，显色弱灵敏度低，花板无梯度背景高等现象。下面对以上实验现象进行解析。
1、白板现象：所有孔的颜色均为无色，即无信号呈现。
可能原因：试剂已过保质期，不同批次稀释液交叉使用；
洗板或者加样过程中，酶标记物被污染失活，稀释液中含有酶抑制剂如叠氮呐等；
洗涤液是浓缩型的，没有按比例进行稀释。
2、花板无梯度背景高：在进行底物TMB溶液显色后，酶标板中的孔有颜色但没有梯度，背景较高。
可能原因：底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存，实验前溶液已经变蓝；
孵育温度过高或者孵育时间过长，发生了较强的非特异性吸附。
3、显色灵敏度低：显色比较浅，即只有微弱的信号呈现。
可能原因：洗涤液稀释倍数不符合要求，洗板次数过多，洗板冲击力过大，洗板浸泡时间过长；
底物溶液TMB显色时间太短。
由于篇幅限制丁香实验在这里不能详尽所有的实验问题，欢迎各位科研er进入丁香实验获取ELISA实验相关问题及解决方案。
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