师姐不教!7 步法让细胞铺板更均匀

2023-05-30 19:02 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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在细胞间,细胞铺板大概是最常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀:要么中间密周围稀,要么周围密中间「秃顶」。今天分享技巧,只需 7 步!让你的细胞铺板更均匀。



「进阶」

细胞培养常见问题


在细胞铺的均匀以后,就要重点关注细胞的状态了,培养液中各成分的比例与使用方法都是有讲究的,以下问题你是否也经常遇到?
1、液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?要冷藏!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的 pH 值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放 6 个月~一年。2、液体培养基中谷氨酰胺的作用,及使用方法几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置 -20℃ 冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基 4℃  冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支 1ml 的谷氨酰胺加到 99ml 完全培养基中,其终浓度为 2mM/ml 培养基。包装为粉红色,-24℃ 保存。3、培养用液 pH 对细胞生长的影响由于大多数细胞适宜 pH 为 7.2~7.4,偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对 pH 的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对 pH 变动耐受差,无限细胞系耐受力强。但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些,偏酸环境中更利于细胞生长。因此,我们在配制培养用液时,可把液体的 pH 稍微调得偏酸一些。液体在经过 0.10um 或 0.22um 滤膜过滤时,溶液的 pH 还会向上浮动 0.2 左右。以上内容来自丁香实验小程序。丁香实验做更优质的实验内容资讯离不开各位科研 er 的支持和关注!如果你是师兄师姐,也欢迎把本篇文章分享给师弟师妹们!
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编辑: 王凯

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