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原代细胞培养与相关实验，比细胞系更有研究价值。它是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。
丁香实验邀请有 3 年以上原代细胞培养经验的硕博实验高手，从「原代细胞分离培养」的实验步骤到常见问题，带你手把手完善细胞实验。
（本专题合作专家）
借助这种方法可以观察细胞的分裂、繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老，死亡等生命现象。本文梳理「5 类原代细胞分离培养方式」，点击下方文字即可查看完整版 protocol：
👉小鼠原代肠胶质细胞分离培养👉小鼠结肠固有层免疫细胞分离👉小鼠骨髓来源巨噬细胞分离培养🐁🧫小鼠骨髓来源中性粒细胞的分离培养🐁🧫小鼠原代结肠上皮细胞分离培养
「原代培养」
注意事项与常见问题
原代细胞培养成本较高，细胞对于培养条件要求较高，因此在培养过程中要格外注意无菌、尽可能去除目标细胞外的其他细胞。
- 实验前所有器械消毒，高压灭菌，液体无菌过滤；
- 酶消化液现用现配；
- 实验中注意充分消化以保证检测细胞量足够；
- 尽可能充分去除成纤维细胞；
- 用于后续培养需保证全程无菌操作。
在原代细胞培养过程中会遇到实验相关问题，丁香实验汇总了细胞培养常见 QA，包括培养条件、培养状态等问题。Q：保存血清最好的方法?A：建议血清应保存在 -5℃ 至 -20℃。然而，若存放于 4℃ 时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。Q：如何解冻血清让培养状态更好?
A：建议将血清从冷冻箱取出后，先置于 2～8℃ 冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
Q：血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?
A：血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。
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