盘点！8 个核酸电泳常见问题

「核酸电泳」

的 6 个决定因素

在了解了核酸电泳常见问题、关键步骤外，还有 6 个决定因素需注意：

1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响 DNA 的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。

2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，熔化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。

3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和 pH，应经常更新电泳缓冲液。

4、样品加入量：一般情况下，0.5 cm 宽的梳子可加 0.5 μg 的 DNA 量，加样量的多少依据加样孔的大小及 DNA 片段的数量和大小而定。

当加样孔大时，样品上样量应相应加大，否则会造成条带浅甚至辨认不清；反之则应适当减少加样量，因为上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的 DNA 片段，此现象更明显。

5、DNA 样品：样本中盐浓度会影响 DNA 迁移率，平行对照样品应使用相同的缓冲条件以消除这种影响。

6、DNA 迁移率：取决于琼脂糖凝胶的浓度、迁移分子的形状及大小。采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的 DNA 分子，制备琼脂糖凝胶可根据 DNA 分子的范围来决定凝胶的浓度。小片段 DNA 的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。

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