小分子蛋白真的很神秘，可能跑 30 次，才能现身一次。究竟怎么做小分子蛋白 WB 才能让它们「现身」，这份经典攻略请收下：
「进阶」
条带弱的其他原因
其实小分子蛋白 WB 经常失败，主要会体现在：没有条带或者条带弱，我们总结了两种结果原因盘点与建议：
01、没有条带原因盘点
抗体染色不充分：建议增加抗体浓度，延长孵育时间。
酶失活：直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。
标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低：设置阳性对照，如果阳性对照有结果，但标本没有则可能是标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考虑增加标本上样量解决靶蛋白含量低的原因。
试剂不匹配：一抗与组织种属，一抗与二抗或/和底物与酶系统之间不匹配。通过设置内参照可以验证二级检测系统的有效性。
一抗失效：选择在有效期内抗体；并选择现配现用的工作液。
HRP 抑制剂：所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。
02、条带弱原因盘点
抗体染色不充分：增加抗体浓度，延长孵育时间。酶活性降低：直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。标本中靶蛋白含量太低：增加标本上样量洗膜过度：缩短洗涤时间HRP 抑制剂：所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。抗体活性降低：选择在有效期内的抗体，工作液现配现用，避免长时间放置。封闭过度：减少封闭剂的量或缩短时间；换用不同封闭剂类型。曝光时间过短：延长曝光时间。HRP 抑制剂：所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。以上就是小分子蛋白 WB 经验分享以及排查方式，更多内容可进入丁香实验小程序进行排查。丁香实验做更优质的实验内容资讯离不开各位科研 er 的支持和关注！如果你是师兄师姐，也欢迎把本篇文章分享给师弟师妹们！
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