本人，准备日后去三甲医院大干一场的，平平无奇新进医学生一枚。最近接了课题，去临床收集病人样本（真的很珍贵），打算送 RNA-seq 用作后续研究，但提 RNA 就频繁翻车，protocol 已对我毫无用处。眼见样本快见底了，实验还没进展，导师大概已经开始后悔招了我吧......
理想中 RNA 应该是 28S、18S 根根分明，5S（要很淡很淡）。但事实是，28S、18S 毫无踪影，5S 亮成闪电！
但，排除了一切干扰因素，剩下的再离谱都是正确答案：样本前处理这个环节出了问题！因为咱的研磨维持的是一种最朴素的方式--研钵。这不光考验手的力量，同时也考验爆发力和持久力，我这不到 90 斤的小身板研磨几十个样本下来，还能跑出美丽的结果图，愿称之为神迹。
样本前处理作为基因检测的第一步，对最后测序结果的质量呈现以及后续临床研究尤为关键。不同的医疗样本根据样本的特点，需采用不同的前处理方式：
细胞/动物组织篇
样本特点
组织成分单一，核酸含量相对丰富，其他杂质相对较少，相对易于提取
样本前处理
(1) 贴壁培养细胞
1. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，离心弃上清，加适量裂解缓冲液振荡至彻底悬浮，进行下游提取。
2. 弃贴壁细胞细胞培养液，PBS 洗涤 2 遍，加入裂解液直接裂解。
（2）组织样本
取适量的动物组织，尽量剪成小块，加入组织消化液匀浆成细胞悬液，然后加入细胞裂解液进行裂解。
匀浆方式可以使用研钵进行手工液氮研磨或者采用组织研磨仪（OSE-TH-02）进行高通量自动化研磨。
FFPE 篇
样本特点
1. 材料成分复杂：FFPE 样本中含有大量的石蜡，石蜡会影响裂解液发挥作用，会对核酸提取造成非常大的干扰。去除石蜡的方法有二甲苯法和其他的特殊方法，脱蜡之后对裂解液的要求也比较高，需要高效的脱蜡方式和充分的裂解方式相结合。
2. 样本保存在石蜡中，样本不够新鲜，对裂解液的裂解能力要求非常高。
样本前处理
样本处理
a. 石蜡切片：取石蜡切片（5~10 μm 厚，1×1 cm2大小）5~8 张。
b. 石蜡块：手术刀刮取约 30 mg 的组织样本（尽量去除多余的石蜡）。
注意：如果样品表面暴露于空气中，最初刮取的 2~3 片弃掉不用。
c. 福尔马林等固定液中的样本：取 30 mg 样本，用手术刀切为数块，置于 1.5 ml 离心管中。
加入 PBS 涡旋振荡混匀室温离心，弃上清，重复 3 次。
将样本装于无菌离心管中，加入二甲苯或环保脱蜡剂，剧烈涡旋。加入裂解液等按照说明书进行提取。
唾液口拭子篇
样本特点
1. 获取的新鲜唾液/口拭子样本，需及时加入保存液，未加保存液或保存液只含有生理盐水，都不利于样本的长期保存。
2. 口拭子样本所刮取的脱落细胞数目有限，需要尽可能提高提取得率和纯度，创造更好的下游实验条件。
样本前处理
（1）口拭子样本取样方式
使用棉签在面颊内擦拭 10 次。（注意：为了保证样本不被食物或者饮料污染，取样前 30 min 内请勿进食和饮水。）将在面颊内擦拭过的棉签转置于离心管中，用剪刀将棉签部分从其杆上剪下。
（2）唾液样本采集之后加入等体积的组织消化液即可进行提取。
微量样本篇
样本类型
小剂量的血液、干血点、血清/血浆、微量组织、漱口水、毛发、微切割穿刺组织等微量样品。
样本特点
样本体积小，核酸含量低。对于体表肿物、淋巴结、甲状腺、肝脏、肺、乳腺、肾脏病的穿刺组织样本，样本成分复杂，除了有正常的组织共有的成分以外，还有很多其他的物质，需要高效的样本处理方法，以使样本充分裂解，蛋白充分去除，以免对下游实验造成影响。
样本前处理
1. 小剂量的血液、干血点、血清/血浆、微量组织、微切割组织微量样品不需要前处理，直接加入裂解液。
2. 漱口水样本的前处理需要在 50 ml 无菌管中添加 10-20 ml 漱口水样品，800 rpm (~1,800×g) 离心 5 min，将上清小心倒掉，再向沉淀中添加缓冲液重悬，将全部悬液转移至1.5 ml离心管中。
3. 含毛囊的毛发：在 1.5 ml 离心管中加入缓冲液，蛋白酶 K， 1 M DTT，混匀。从毛发根部毛囊处取 1 cm 长的一段，与上述溶液涡旋混匀 10 sec。
TIANGEN 深耕核酸纯化领域多年，拥有丰富的样本前处理和提取解决方案，目前针对样本RNA提取中RNA 性质不稳定，易降解这一难点，专门开发了 TGrinder H24R 组织研磨低温均质仪，处理 24 个样本仅需 30-60 秒，帮助大家高效解决科研中遇到的疑难样本前处理问题。
TGrinder H24R 组织研磨低温均质仪
(目录号：OSE-TH-02)
三大核心特点
● 三维振动模式，研磨力度大，效果更均一
● 主动降温，无需液氮/干冰，避免 RNA 或蛋白降解
● TIANGEN 可提供多种样本核酸提取完整解决方案
研磨仪实际应用结果展示
常规动物样本
物种来源：小鼠、鲫鱼、猴、人、猪肉等
组织类型：心脏、肝脏、肌肉、脾、肺、胃、脑、肠、鳃等
图1 小鼠组织低温均质仪研磨后提取RNA结果
特殊动物样本
物种来源：人，小鼠、大鼠、猪等
组织类型：皮肤、软骨、肿瘤组织、毛发等
图2 人骨肉瘤组织低温均质仪研磨后提取RNA结果
扫码了解更多样本库详情
内容策划：王丹琦
内容审核：朱超敏
题图来源：自己做的