细胞传代一定要超过 24 小时吗？这 6 点一定要注意

细胞传代/复苏做得不好，会导致状态不好、密度低、不均匀、状态差。传代一定要超过 24 小时吗？如果细胞状态好，密度大，没到 24 小时就传代的话，会对细胞状态有影响么？

「进阶」

细胞传代注意事项

除了把握传代时机，已如前述，在 80%~90% 汇合阶段最好，过早传代细胞产量少，过晚细胞健康状态不佳。还有很多其他变量，会影响细胞传代效率，以下内容来自「细胞传代标准 protocol」，可提前收藏，优化实验。

1、消化时间要适度，消化时间过短细胞不易从瓶壁脱落，过长细胞可脱落流失。

2、消化液浓度要适宜，过浓时消化作用强烈，细胞反应快，所需消化时间短，掌握不好，细胞易流失。

3、各种细胞对消化反应不同，有的敏感，有的迟钝，因此应根据所用细胞特点制定适宜消化措施。有的细胞附着瓶壁不牢，用吸管可从瓶壁直接吹下来，但这样容易伤害细胞，细胞大片脱落掉，不易计数，应尽可能采用消化法分散细胞为妥。

4、消化传代良好时，细胞受损害少，细胞悬液均匀，各分装样品中数量误差小，细胞生长增殖速度一致，实验结果可靠性大。

5、无菌操作：细胞的整个培养过程中，无菌操作，包括操作前要洗手，进入超净台前要用 75% 酒精擦拭，试剂等瓶要 75% 酒精喷浴后才能放入超净台 。操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。不同细胞，不同操作之间需要换枪头，避免污染。