不知道以上崩溃瞬间你中了几条，文章底部留言，分享你做 WB 的崩溃瞬间吧~本来 WB 流程就比较繁琐，不断失败与重复中，无力感更是会反复循环，一个小小的实验，却让人辗转反侧、「秃了脑壳」。
完整的 western blot 实验从样品制备开始，到跑胶、转印、封闭、抗体杂交、成像涉及各个环节，其中任何步骤出现问题，都会影响到最终的实验数据质量。为了保住各位本就余量不多的头发（这是在阴阳谁？！
），我们特备了关于电泳和转印环节的 11 条 Tips，让大家在 WB 实验中乘风破浪，不再头秃！
Tip 1：
洗净上样孔
在加样之前，用移液枪吹洗每个上样孔，洗净残留在上样孔中的丙烯酰胺残渣，从而避免畸形条带的出现。
Tip 2：
凝胶过热是大忌
如果凝胶在电泳过程中温度过高，则条带可能会出现「微笑」形状，即条带两侧向上弯曲的现象。切记要正确使用缓冲液，并控制好电泳功率，避免凝胶过热的出现。
Tip 3：
确保样品缓冲液离子强度正确
样品中的盐离子强度过高（或过低），都会导致条带出现偏斜或扭曲。如果样品提取过程中用到高盐溶液，就有可能要在上样前进行稀释或脱盐处理。
Tip 4：
不要过载上样
加大上样量有利于检测稀有目标蛋白。但过大的上样量会导致电泳过程中出现垂直条纹。如果必须大量上样时（> 30 ug 总蛋白），可将电泳电压降低 25％，有助于减少条纹。
Tip 5：
转印三明治要去除气泡
均匀的蛋白质转印需要三明治的各组件之间完全接触，尤其是凝胶和膜完全接触。没有去除的气泡会导致膜上出现空白点，直接影响实验结果！建议使用凝胶滚轮将这些气泡通通赶走！（提示：梯度凝胶最好上下滚动，而不是左右滚动。左右滚动会导致梯度凝胶翘曲和起皱。）
在这里给大家介绍一款赶气泡神器：Bio-Rad 正品 Roller，产品货号 1651279。有兴趣可以扫码申请试用~
Tip 6：
转印前的预平衡
湿转和传统半干转时，将凝胶电泳缓冲液替换为转印缓冲液可获得更好的转印效果。电泳缓冲液的带入会增加电导率，从而导致转印过程中产生过多的热量。可在水中短暂冲洗凝胶，然后在转印缓冲液中平衡凝胶 15 分钟，平衡膜 5 分钟。请注意，对于某些快速转印系统，不建议使用凝胶预平衡，请遵循制造商的操作指南。
Tip 7：
NC 膜转印时避免使用 SDS
转印缓冲液中的 SDS 会降低蛋白质与硝酸纤维素膜的结合效率，所以在使用 NC 膜时要避免缓冲液体系内有 SDS。转印前用水冲洗凝胶，以便减少 SDS 带入转印体系。
Tip 8：
PVDF 膜可使用 SDS
SDS 可以促进蛋白质从凝胶中洗脱，如果某些蛋白质难以从凝胶中洗脱，则可以将 SDS 添加到转印缓冲液中，前提是必须使用 PVDF 膜。
Tip 9：
避免膜变干
在转印之前和之后均需保证膜的湿润，从转印三明治中取出后，转印热量会使膜容易变干燥。应迅速将膜浸入预先准备好的缓冲液中，以免膜干燥。（尤其是在使用 PVDF 膜时要格外注意，因为 PVDF 膜是疏水的更容易变干）。如果干了，可将硝酸纤维素膜重新在缓冲液中浸湿，而 PVDF 膜则需要在醇中重新活化。
Tip 10：
半干转印功率及时间设置
使用高电场转印可获得更高的转印效率，但是一定要注意系统的散热能力，避免凝胶过热。转印期间，「三明治」温度升高会导致电阻变化，进而引发转印效率不均一，缓冲液失去缓冲能力，甚至凝胶融化。半干转印在电流下降接近为零时，延长转印时间不会增加转印效果。
Tip 11：
使用两张膜判断蛋白是否会转穿
薄胶或低浓度胶转印过程中蛋白容易转穿，特别是针对小分子量蛋白。可以转印时叠放两张转印膜，然后对第二张膜进行总蛋白染色（丽春红或 Stain-Free 免染）的方法来判断是否已经转穿。
限时促销：经典 Bio-Rad 两胶电泳槽
相信注意以上细节后，你一定会迎来一场完美的 western blot 实验！好的实验结果除了技术外，硬件支持也必不能少，经典 Bio-Rad 两胶电泳槽（货号 1658005）前来为你助力！
● 产品名称：小型垂直电泳槽
●促 销 价：不高于 2,900 元
●英文名称：Mini-PROTEAN Tetra Vertical Electrophoresis Cell for Mini Precast Gels, 2-gel
● 货号：1658005
●产品优势：
Mini-PROTEAN Tetra 电泳槽是进行小型垂直电泳的理想选择，2 胶小型垂直电泳槽可容纳 1~2 块手灌胶或预制胶。
Mini-PROTEAN Tetra 电泳槽省去了冗长的组装程序，具有专利的盖装置，可防止错误组装。系统具有专利的上样引导装置，防止泳道遗漏上样或重复上样。
可互换的模块使 Mini-PROTEAN Tetra 电泳槽有多种用途，除可进行垂直电泳之外，还可配置转印芯，以进行湿转操作。
注：
1. 相关产品仅限科研使用，不作为临床诊断。
2. Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标
内容策划：王丹琦
内容审核：周育红
图片来源：图虫创意
促销火热进行中，点击「阅读原文」即可直达询价~