丁香实验邀请有 3 年以上克隆经验的硕博实验高手，替大家答疑解惑。从优化实验步骤，到经验分享，带你手把手完善分子克隆实验。
（本专题合作专家）4 种分子克隆
protocol
一步法克隆，是一种简单、快速和高效的克隆技术，能够将扩增的 DNA 产物定向插入任何线性化载体的任何位点，线性化的载体和插入片段的 PCR 产物无需纯化即可直接用于重组，非常简便。
粘性末端克隆，使目的 DNA 片段和载体产生不平齐的粘性末端，然后在 DNA 连接酶的作用下，将酶切后的目的 DNA 片段和载体进行连接，构成重组载体。
SLIC 克隆，是一种基于 DNA 重组技术的克隆方法，通过利用外源 DNA 和目的 DNA 的线性化切片段相互衔接，使用序列无关的连接酶将它们连接起来，从而实现基因片段的拼接。
Topo 克隆，是一种基于转座子元件的 DNA 插入方法，适用于插入小片段的 DNA 序列（约为 4~5 kb）。
7 年
分子克隆经验
或许很多人会说分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了。问题多集中在连接的体系、DNA 的用量、vector 和 insert 的比例、连接酶等。
但是连接不成功，问题并不一定出在连接这步上。有很多环节影响连接的成败，如酶切的好不好、回收的质量好坏、连接时的浓度或比例、感受态等。
以下文章汇集了 7 年分子克隆经验，可能会解决你的问题。
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