文末可领取免费科研入门教学资源双荧光素酶实验应用广泛，可以用于基因表达调控（如与 mRNA 靶向互作调控表达）、信号转导（验证信号通路是否激活）、转录因子的启动子结构分析等。
丁香实验上线「双荧光素酶实验」标准 protocol ，邀请有 3 年以上荧光素酶经验的硕博实验高手，替大家答疑解惑。一起来优化实验吧！
「进阶」
荧光素酶报告基因的优点
优越的灵敏度，比 Westernbloting 灵敏度高 1000 倍以上；内源性低，哺乳动物无内源性表达；荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响；发光检测，检测方便；灵敏度高，10～20 摩尔荧光素酶分子；检测范围广，大于 7 个数量级。
「进阶」
荧光素酶报告基因的注意事项
萤火虫荧光素酶底物按需分装以避免反复冻融，-80 ℃ 避光保存，海肾荧光素酶底物现配现用。
实验前各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要恢复到室温，实验操作过程中注意避光，整个过程尽量在 30 min 内完成，每个样品需充分混匀，并且混匀次数和时间尽量保持一致。
如果细胞裂解产物需要暂存，常温不超过 6 小时，-20 ℃ 一个月，-80 ℃ 半年。
测量的荧光值较低？
首先排除转染效率问题，12 孔板多铺一孔细胞转染荧光质粒，观察转染的荧光效率，并设立阳性和阴性对照。排除转染问题后，如果荧光读值仍然较低，可以尝试增加转染质粒量。
测量的荧光值过高？
减少转染质粒量，或者适当稀释细胞裂解离心后的上清液。
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