标准的实验方法是什么？
常见问题与注意事项有哪些？
别担心，丁香实验上线「transwell 」标准 protocol ，邀请有 3 年以上 transwell 经验的硕博实验高手，替大家答疑解惑。一起来优化实验吧！
（本专题合作专家）Transwell
实验注意事项
1. 下层培养液和小室间常会有气泡产生。一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，因此在种板的时候要特别留心。一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
2. 培养细胞的时间为 24h 较常见。时间点的选择除了要考虑到细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
3. Transwell 孔径的选择需要考虑实验的目的和实验细胞的大小。如不涉及研究细胞运动能力通常是选择 4 μm 或者 3 μm。
4. 细胞悬液的制备数量要合适：细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
5. 细胞在小室内的形态有可能不是正常培养贴壁的形态，而是圆形的，仍是悬浮时的形态，不过会聚集成团，属正常现象（别人的经验，注意观察）。
6. 如果研究细胞侵袭实验，则需要在第一步进行 Matrigel 基质胶铺板。
7. 细胞接种时尽量均匀，建议沿着壁缓慢加入。
以上就是丁香实验最新上线的 transwell 经验汇总 。
如果以上内容不能解决你自己的实验问题，也可以进入小程序进行提问，48 小时内有问必答。海量细胞培养经验的硕博士，会替大家答疑解惑。一起来优化细胞实验吧！
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