肿瘤研究一直是基础医学领域和临床医学领域的大热门，然而看着别人的重量级成果一个接一个，论文一篇接一篇，自己却还在为实验头秃：
● 不是样本提取的核酸质量太差，就是找不到测序结果中的差异基因；
● 流式样本制备细胞活性低，多色方案配色搞不定；
● 做WB背景又脏又乱，目的条带没有，杂带倒是一堆；
● 最后想着做个活细胞成像，拍了一天发现大多数细胞都跑路不在视野内，仅剩的荧光还猝灭了……（文中含有奖调研和实验手册免费领）
除了以上问题，如果您对基因编辑构建相关细胞系或 3D 细胞及类器官培养、其他的关于癌细胞相关研究思路或者实验操作也感兴趣，我们准备了肿瘤细胞培养、成像和免疫学研究相关技术手册，供大家免费领取。
同时，为了帮助大家更好的完成肿瘤相关研究，更顺利地在实验上乘风破浪，我们准备了简单的有奖调研活动，点击「阅读原文」或扫描下方二维码完成调研，在免费领取技术手册的同时，您还有机会赢取无线蓝牙键盘、凌美笔、nalgene 水杯等 200 份惊喜好礼哦~
▼ 扫描二维码，赢惊喜好礼▼
活动规则
1、参与奖限量 180 份：即日起至 2023 年 5 月 10 日，前 180 名完整填写问卷，经信息核实正确后，就有机会获得 Nalgene 水杯、加湿器、时尚棒球帽、帆布袋、DNA70 周年胸针等好礼（每人或每个手机号限领 1 份，礼品随机发放）
2、幸运奖 30 份：即日起至 2023 年 5 月 10 日，在完成问卷填写者中随机抽取 30 位幸运儿，赢取获得无线蓝牙键盘、凌美笔、无线鼠标！（礼品随机发放）。
3、礼品将于活动结束后 20 个工作日内安排发放。
4、若相关礼品派送完，赛默飞会用等值的其他礼品代替。
5、如发现问卷内容乱填、错误等内容，则默认放弃礼品。
（上下滑动 查看全部）
手册内容抢先看
今天带大家从基因、蛋白以及细胞三个层次中，挑选了一些癌症相关研究可能遇到的重难点易错点问题进行解答。
♦ 基因 ♦
1. 无法从样本中分离出高质量的核酸
可能原因：样本保存不当或者反复冻融过；组织样本裂解不完全；细胞样本浓度太高裂解不充分；外源核酸酶降解等
解决方法：尽量选择新鲜的样品，不能立即处理的样品应进行低温保存（液氮或 -80℃）或者用保存在类似 RNAlater 的稳定溶液中，避免核酸降解。样品处理时应适量，液氮研磨或匀浆时应充分，使样本裂解完全。尽量使用无核酸酶的实验用品，经常使用核酸酶去污剂清洁，定期对实验室进行核酸酶检测。
2. 无法从复杂的 NGS 数据中挖掘有效信息
可能原因：样本对象不具有代表性；测序深度不够；缺乏生物信息学知识难以对数据进行分析
解决方法：可先确定好目标基因，再针对目标基因进行靶向测序，数据分析模型可参考文献，也可求助于专业人士。
♦ 蛋白 ♦
1. 免疫沉淀靶标检测不到
可能原因：靶标蛋白丰度低或者难分离；靶标蛋白在处理过程中已降解；抗体特异性不高；抗体与 beads 结合效率低，靶标蛋白洗脱效率低等
解决方法：可先通过文献查找，对靶标的丰度进行确认，如果丰度低则可使用高载量的 beads 尽可能的收集靶标蛋白；样本处理应选用温和的裂解试剂，并加入蛋白酶/磷酸酶抑制剂，最大程度保证靶标蛋白的完整性；选择经过 IP 验证过的抗体，并且按照说明书比例进行使用；使用与抗体匹配 beads，或者盲选带有 Protein A/G 的 beads，或者选择不依赖抗体种属的固定方式，比如直接法 IP
2. 体外表达蛋白产量低
可能原因：表达系统不合适；密码子未做优化
解决方法：各类蛋白表达系统各有优缺点可按需选择，例如原核系统载体灵活且成本低，但有些蛋白无法正确折叠，哺乳系统虽然昂贵但表达的蛋白具有高水平的翻译后修饰和折叠，另外在合成时可按照所选系统进行对应的密码子优化。
♦ 细胞 ♦
1. 肿瘤细胞难以进行转染
可能原因：细胞转染后死亡率高；肿瘤细胞对外源 DNA 具有其防御机制
解决方法：使用普通的 PEI 试剂对肿瘤细胞转染效率低下且对细胞伤害性大，可选用转染效率更高且对细胞伤害更小的转染试剂，如 Lipofectamine 3 000 等。
2. 难以构建 3D 肿瘤细胞模型
可能原因：营养需求不同于正常细胞；除去间质使肿瘤细胞失去基质、营养物质及自分泌生长因子；培养条件不合适
解决方法：选择和培养具有代表性的细胞系用于 3D 培养，优化培养条件和接种密度，可使用 Nunclon Sphera 超低吸附培养板促进形成细胞球状体，同时，向培养体系中添加特定的细胞外基质也可以促进球状体的形成。
3. 肿瘤细胞成像做不好
可能原因：活细胞成像易跑焦、易逃离视野；细胞状态不好
解决方法：出现跑焦时，可在机器运行后静置一段时间后再进行拍摄，或者使用自动对焦功能，细胞漂移可选择倍率低的镜头拍摄大的视野。为观察到最佳状态的细胞，应该注意控制染料浓度、激发光强度和二氧化碳浓度、温湿度等环境因素。当然，也可尝试赛默飞 EVOS 智能细胞成像系统，一键即可轻松获取高质量成像数据，从此告别负责成像系统带来的多重困扰。
（上下滑动 查看全部）
更多精彩内容，现点击「阅读原文」完成调研，可免费领取《癌症研究指南》、《流式细胞分析实验方案》、《细胞成像分析方案》、《癌症研究热门信号通路抗体集》、《生物标志物定量指南》等手册！
● 《癌症研究指南》手册汇集了核酸、蛋白和细胞层面的全流程解决方案，从培养、改造到检测全面助力肿瘤实验到临床方案的探索。
● 《流式细胞分析实验方案》中包含了从样本制备、表型分析及细胞活性凋亡检测的流式实验步骤，使用这本手册，更好地完成流式实验。
● 《细胞成像分析方案》汇集了成像实验的详尽实验方案，其中包括了详实的实验技巧、小贴士、试剂耗材目录以及图像采集的显微镜类型。
● 《癌症研究热门信号通路抗体集》涵盖了肿瘤相关信号通路介绍以及关键靶标的抗体目录，详尽的内容可以帮助您最大限度地节省时间！
● 《生物标志物定量指南》涵盖了单个和多个生物标志物定量检测的所有可用产品，可用于炎症、癌症、神经生物学、免疫球蛋白同种分型、SARS-CoV-2 血清、心血管疾病、代谢等重要研究领域。
除了上述内容，赛默飞还可为您提供全面的技术支持、解决方案、实验教学视频。点击「阅读原文」，下载上述多本癌症研究手册及更多丰富学术内容。
内容策划：邹礼平
内容审核：吴军
题图来源：图虫创意
点击「阅读原文」，下载更多技术手册！