养细胞最担心状态不好。除了培养、污染问题以外，还有一个关乎细胞质量的问题很容易被忽略。
细胞系的「保质期」就是其中之一。上周师妹收集的 Hela 搞砸了 3 个实验。经过组会上导师一番拷问，才发现师妹用的是足足在负 80 冰箱呆了 3 年的「僵尸」细胞。师姐连忙补救，将「经典细胞问答」发到群内，提醒师弟师妹们赶紧学习。
这份「经典细胞问答」来自丁香实验的问答广场，大家有问题还可直接发布，就有科研大神 48 小时内给出解决方案！更有安捷伦–Seahorse 赞助支持的 U 盘，胶囊伞等实物好礼包邮送！
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问题一：细胞在负 80 冰箱，究竟能存多久？
在冰箱里拿细胞用的时候一定要看好标记日期，在 -80 ℃ 冰箱冻存的细胞一般半年左右复苏培养时完全没有问题；存入液氮的细胞，则可以长期使用。
问题二：细胞总是铺不匀，怎么优化?
● 细胞在离心管中加入适量培养基混匀以充分使细胞团分散，培养基加太多导致细胞团分不散；
● 将吹散的细胞加入器皿时需要用枪轻轻上下混匀；
● 细胞加完需要将器皿轻轻晃动，不要只往一个方向晃动，不要摇动过久。
问题三：流式细胞学检测时，细胞为何有很多碎片？
● 固定时间太长会让细胞碎片增多；
● 重悬细胞不建议用旋涡震荡，可使用吸头吹吸，注意不要吹起气泡；
● 消化过度，可适当降低浓度或减少用量来降低胰蛋白酶消化对细胞的损伤；
● 传代后次日细胞换液，先用缓冲液漂洗两次以洗去未贴壁的细胞及细胞碎片，再加入新的培养液继续培养；
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细胞实验是科研中最为基础，也最容易出现问题的一类实验。
除了上述 3 个高频实验问题，大家在细胞实验过程当中，遇到任何问题，都可以到丁香实验的问答广场上找找方法，也可以直接发布问题，科研大神 48 小时内就会给出解决方案！
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内容策划：潘成
内容审核：朱晓芳
题图来源：图虫创意