PCR 二聚体究竟长啥样?怎么消除

2023-04-21 19:04 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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每个科研人,都经受过引物二聚体的折磨。
  • 二聚体长啥样?
  • 引物二聚体是如何形成的?
  • 究竟要怎么避免引物二聚体?

丁香实验整理了 PCR 实用技巧:七大方法消除引物二聚体经验图文,简单几分钟,轻松搞定它!



「进阶!如何区分」

引物二聚体 & 目的条带


因为引物二聚体的大小从几十 bp 至几百 bp 不等,所以当你的目的条带的分子量比较小的时候,电泳后所看到的结果不一定是目的条带,很有可能是引物二聚体,因此我们需要一个有效的方法来区分二者。

第一步,理解原因

引物二聚体形成的本质是引物之间或者引物自身的 3’ 端区域存在部分互补结合。就是说,引物的形成是不需要模板的参与的,所以我们只需要在电泳的时候添加一组对照,就可以有效地判断是否有引物二聚体的形成。

第二步,加入对照

这个对照模板可以用水替代,其他的和正常孔保持一致

如果这个泳道有条带出现,那说明形成了引物二聚体(当然前提就是该体系没有被模板污染)。从这里也可以看出设置对照的重要性,一个巧妙的对照往往可以达到事半功倍的效果!

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编辑: 王凯

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