点此领免费科研入门教学资源常用的 ELISA 可分为五大类：直接 ELISA、间接 ELISA、夹心 ELISA、竞争 ELISA、竞争抑制 ELISA。实际上，不管是哪一种ELISA，操作方法都离不开以下 6 步：
①将抗原或抗体吸附到固相载体上；②加入待检样品以及后续试剂；③温育；④洗涤去掉游离未结合的反应物；⑤加入酶检测底物；⑥结果的判读
过程繁琐，实验就很容易出现问题，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。究竟 ELISA 如何做最标准？样本制备、数据处理如何才能不出错？
丁香实验整理了 protocol、经验图文、教学视频、以及实验中常见的问题。简单几分钟，轻松入门 ELISA！
「ELISA 常见问题」
以及如何解决
ELISA 实验生物灵敏度高，特异性强，安全可靠，是免疫学中的经典实验。丁香实验准备了 ELISA 教学视频、常见问题以及方案，速戳下面卡片学习吧！
常见问题 1: 试剂准备有哪些讲究？
在实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
常见问题 2: 如何正确加血清样本及反应试剂？
在现在的 ELISA 商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是唯一的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。
常见问题 3: 温育步骤如何稳定拿下？
温育是 ELISA 测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA 作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有 37℃ 和室温，其次是 43℃ 和 2～8℃。
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