6 大方法!检测细胞增殖(protocol 合集)

2023-04-12 18:06 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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细胞增殖实验,在分子生物实验中非常重要,它是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。常用的方法包括胸腺嘧啶核苷渗入法、MTT 检测法、CCK8 检测法等。但最直接精确的就是 EdU、BrdU 标记法。


细胞增殖实验较多应如何选择?

哪一类检测试验最精准便捷?


别担心,丁香实验上线「细胞增殖检测」标准 protocol ,汇集 6 种增殖检测方法,并推荐最优选择。邀请有 3 年以上细胞培养经验的硕博实验高手,替大家答疑解惑。
(本专题合作专家)


EdU 检测

细胞增殖


与传统的免疫荧光染色比较,EdU 反应非常快速,几分钟内即可完成,且不需要进行 DNA 变性处理,只需简单的几个步骤即可,使得组织成像或者流式检测更简单易行。
因此也适用于高通量筛选试验,尤其适合进行 siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

EdU 优势显著:
1、相比于 BrdU 检测方法,EdU 在 DNA 合成的过程中引入快速点击化学反应,并且不需要苛刻的、化学性的或 DNA 结构的破坏。
2、BrdU 抗体分子过大,掺入双链 DNA 内的 BrdU,以氢链与腺嘌呤结合,不能直接与 BrdU 抗体反应。EdU 只有 BrdU 抗体大小的 1/500,在细胞内更容易扩散,不需要严格的样品变性处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度。

BrdU 检测

细胞增殖


5-溴-2'-脱氧尿嘧啶(BrdU)是 DNA 前体胸腺嘧啶核苷类似物,通过竞争掺入 S 期细胞单链 DNA 核苷酸序列替代胸腺嘧啶。

目前,BrdU 标记新合成 DNA 的方法在动物细胞组织的肿瘤生物学、遗传学、分子生物学等领域已得到广泛的应用。


其它方式检测

细胞增殖


除了以上两种,其他方法还有:
直接计数法检测细胞增殖👉是一种粗略估算细胞存活率的方法。
CFSE 染色法检测细胞增殖👉使用荧光染料 CFSE,是一种可穿透细胞膜的荧光染料。
3H-TdR 掺入法检测细胞增殖👉感性高,客观性强,重复性好。但是需一定设备条件,同时还存在放射性核素污染问题。
噻唑蓝比色法检测细胞增殖👉也就是 MTT 法,该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选以及肿瘤放射敏感性测定等。
以上就是 6 大方法检测细胞增殖,以及丁香实验最新上线的 EdU 细胞增殖检测实验。

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编辑: 王凯

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