A260 /A280,A260 /A230 看不懂的进!

2023-04-06 19:31 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
字体大小
- | +

最近研二的师弟在狂做 QPCR。

师姐救救我,导师让我做 QPCR,但是提完 DNA 这里测 A260 /A280 是什么意思?不懂了

A260 /A280,A260 /A230 是常用的评价 DNA 纯度的指标,这一步没问题才能继续做 QPCR!






「A280、260、230」

都代表什么?



常见的 DNA 提取方法是 TRIzol 法。提取完成后应测定 DNA 的浓度及吸光度。通常,在 260,280,230 nm 处分别测定其吸光度(A260、A280、A230)并计算其比值(A260 /A280,A260 /A230)。
这些数据都代表什么含义?

核酸(包括 DNA 和 RNA)的嘌呤和嘧啶具有共轭双键,使碱基、核苷、核苷酸、和核酸在 240~290 nm 的紫外波段有一个强烈的吸收峰,最大吸收值在 260 nm 左右,而蛋白质在这一区域有很弱的吸收。
230 nm处是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长。




「A280/260、A260/230」

有哪些意义?



A260/A280 、A260/A230 是核酸纯度的指示值。纯净的样品 A260/A280 大于 1.8(DNA)或者 2.0(RNA)。如果比值低于 1.8 或者 2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A230 表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、盐(胍盐)等,较纯净的核酸 A260/A230 的比值大于 2.0 。


如果样品的 A260/280=1.7,A260 /230=0.5,那么就应该考虑污染原因不是胍盐残留,而是蛋白残留。


如果样品的 A260/280=1~1.5,260/230=1~1.5,那么污染原因就应该考虑是酚残留。
如果 RNA 样品的 A260/280>=2,A260/230<1,那么污染原因就应该考虑是胍盐残留。
当 A260/230<1 时,只有两种情况。一是胍盐污染,二是蛋白污染。

最后,别忘记点击收藏订阅呀源源不断的更新第一时间提醒你👇👇👇
策划|Olaf配图|丁香实验设计团队


编辑: 王凯

版权声明

本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。同时转载内容不代表本站立场。

  • App下载