病毒载体作为一种基因递送工具，负责将外源基因片段靶向递送到细胞中，对目的基因进行调控以便进行一些基因功能表型的监测。虽然工具病毒载体极大的提高了效率，但在实际进行病毒的包装和感染时，却会遇到各种各样的问题：
● 质粒片段过大无法包装
● 表达持续时间过短
● 细胞能被带 GFP 的病毒感染，但是荧光却很弱
● 细胞加入病毒后，死亡的情况很严重
……
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那么如果想要包装出来的病毒载体效果好，首先转染时需要抓好以下几个关键：
载体系统的选择：主流的工具病毒载体为腺病毒、慢病毒和腺相关病毒载体，需要根据实验周期、目的基因片段大小以及感染的目标来确定最合适的病毒载体。
细胞的因素：需要注意细胞的状态和细胞的密度。
质粒的质量：质粒的质量会直接影响转染的效果，用于转染的重组质粒需要确定构建的正确是否，以及在抽提时保证其质量和纯度。
包装转染控制：可在转染后 24 h 和 48 h 通过细胞状态和荧光的情况来判断转染效果。
目的基因对病毒的影响：基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等都会影响病毒包装的成功与否。
另外丁香实验联合吉凯基因还为大家整理了目前主流三种病毒载体的优缺点和适用场景，以及一些常见问题的解决方案。
感染细胞时常见的问题以及解决方法：
问题1：感染后细胞状态异常
解决方法：主要因素有感染时病毒的 MOI 及感染试剂，若预实验发现高 MOI 对细胞状态有影响，建议后续实验可适当降低 MOI；若预实验中发现加入感染试剂后细胞状态发生明显变化，建议更换感染试剂。
问题2：感染后无荧光或荧光弱
解决方法：感染后无荧光考虑病毒滴度异常，建议更换新的病毒后先进行预实验；无荧光也有可能是该细胞较难感染，建议更换易感染细胞株；荧光弱的情况可以观察荧光比例，若和对照病毒相比，荧光比例上无明显差异可以满足后续实验，建议进行下游实验。
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内容策划：邹礼平
内容审核：周育红
题图来源：图虫创意