最近，师妹又去拜佛了，细胞转染做了一个月还不成功，已经开始怀疑人生了。果然，上课上班不如寺庙上上香，真是当代研究生现状......
对于细胞转染实验，你是不是经历过细胞状态差、转染效率低、细胞污染，甚至压根转不进去的情况？
其实转基因成功率很大程度上取决于选择的转染技术是否适合于该实验。
常见方法包括: 电穿孔法、脂质体转染法、基因枪、病毒介导等，挑选适合的方法及条件，对于转基因成功率至关重要。
Bio-Rad 可提供三种转基因的方案，下表可以根据不同的细胞类型，选择不同的转基因产品。
脂质转染
电穿孔
颗粒传送系统
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I 电穿孔
电穿孔（Electroporation）也叫电转染，是通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将 DNA 与 RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入细胞内。电转化相对其它物理和化学转化方法，是一种有价值和有效的替代方法。电穿孔是功能强大的将核酸、蛋白及其它分子导入多种细胞的高效技术。
电穿孔系统
Bio-Rad 共有两套电穿孔系统，Gene Pulser Xcell 系统和 MicroPulser 系统。
电击杯
Bio-Rad 高品质的电击杯为您宝贵的样品提供稳定的脉冲传送，确保结果的重复性。电击杯有 3 种不同的电极间距 0.4、0.2 和 0.1 cm，针对不同的细胞类型选择最理想的场强。电击杯的特点包括：
➣ 保证效率——使用这些电击杯确保最高电转化效率，制作精良的电击间距公差保证了实验重复性
➣ 通用兼容性——可以用于 Gene Pulser MXcell, Gene Pulser Xcell, Gene Pulser ll
➣ 确保无菌——每一个电击杯都在净室环境下装配、洗涤、加盖和包装，并经过 V 射线
➣ 结构坚固——耐用的聚碳酸酯能承受极高的电压
➣ 标有不同颜色的盖和包装袋——可快速地区分不同规格的电击杯
➣ 腔体形状一致——无缝塑料模制避免了渗漏并保证铝板平行，这是均一的样品处理和安全性的关键所在
➣ 电极表面平滑——铝片经过 11 步严格的蚀刻和清洗处理，确保对整个样品均一的脉冲传送
Gene Pulser 电穿孔缓冲液
Gene Pulser 电穿孔缓冲液模仿了自然细胞环境，在确保高效转化核酸分子的同时也降低了细胞的死亡率。该电穿孔缓冲液是一种通用试剂，可以将 siRNA、质粒 DNA 等分子转染不同的哺乳动物细胞，包括很难转染的细胞和原代细胞。该缓冲液适用于大多数转化系统，包括 Gene PulserXcell 和 Gene Pulser‖ 系统，也同时适用于指数衰减波和方波实验系统。
Gene Pulser 电穿孔缓冲液：
➣ 对于各种细胞类型都允许您优化多个电穿孔参数，包括电压和电容
➣ 增加转染效率和细胞存活率
➣ 低导电率一适用于电击杯和多孔电击板模式
II 基因枪
基因枪技术，又被称为生物弹道技术（Biolistic Technology）或微粒轰击技术（Particle Bombardment Technology），是 用火药爆炸或者高压气体加速将包裹了 DNA 的球状金粉直接送入完整的组织或者细胞中的一种技术。它是转基因技术中的一种方法，其基本原理就是采用一种微粒加速装置，使裹着外源基因的微米级的金（比重大，而且化学性质很稳定）颗粒获得足够的动量打入动植物细胞或组织以及活体动物中。
Bio-Rad 基因枪系统
Bio-Rad 提供 2 种基因枪系统，手持式 Helios 基因枪和台式 PDS-1000/He 系统。
PDS-1000/He 系统推荐的实验条件：
我们建议对各种细胞类型的攻击使用这些设置。许多因素都会影响粒子辐射效率，但大多数用户将会发现它足以逐个优化主要可变因素，然后在有限范围内对这些可变因素的相互作用进行测试。
伯乐现正供应 0.6,1.0,1.6 μm 的三种孔径金粉颗粒（用于核酸包被）Biolistic Delivery Systems
III 脂质转染
Bio-Rad 提供一系列脂质转染试剂，可有效地将核酸导入到各种经培养的哺乳动物细胞系中，包括那些难以转染的细胞， 每种脂质均适用于特定的应用。脂质转染已证明成功转染贴壁细胞、悬浮细胞和一些原代细胞（例如：mES、神经细胞等）。常用于 RNA 干扰、蛋白制备、病毒包装、基因功能分析及细胞学分析。
siLentFect 脂质试剂是适合 siRNA 递送的特定于 RNAi 的脂质。它还可用于共转染小型报告基因质粒和 siRNA 分子。
TransFectin 脂质试剂是适合在范围广泛的细胞系中传递质粒的通用脂质。
转染效果
使用 TransFectin™ 脂质试剂高效转染原代神经细胞
TransFectin 脂质试剂演示主要鼠海马神经元的温和而有效的转染。
使用 siLentFect 脂质试剂，利用以荧光标记的 siLentMer™ nonsilencing siRNA 转染 NIH-3T3 细胞
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注：
1. 相关产品仅限科研使用，不作为临床诊断。
2. Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标。
内容审核：邹礼平
项目审核：周育红
题图来源：Bio-Rad
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