师弟把 qPCR 做成 RTPCR!差点延毕

2023-04-03 18:33 来源:微信公众号 - ShengWuXueBa 作者:生物学霸
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最近实验室的小师弟真的太马虎了!
qPCR、RT PCR、real-time PCR 没分清,论文盲审没通过,这次可能真的要延毕了......

师姐整理了一张 PCR 实验定义表格,以后一定要分清呀👇





懂啦师姐,除了这几种 PCR 以外,还有哪些 PCR 可以做呢?趁这个机会都讲一下吧!



除了以上几种比较常见的 PCR 以外,还有 多重 PCR、巢式 PCR、RACE、原位杂交 PCR。点击下方图片并收藏 PCR 专题,就能查看全部啦!


👇👇👇

多重 PCR
普通 PCR 仅对单一基因进行定性或半定量,对多个基因进行检测时需要分为多个独立体系进行扩增,虽操作简单,但工作量大,耗时耗力浪费样本及试剂。
而多重 PCR 同时能够比对多个扩增子,联合应用 RT-PCR 技术还可达到定量的目的。不仅如此,多重 PCR 还被用于靶向建库测序技术中的文库快速构建。
多重 PCR 常被用于:病原体识别、高通量 SNP 基因分型、突变分析、模板定量、连锁分析、RNA检测、法医研究。

原位杂交 PCR
原位 PCR 常用于研究疾病的发病机理、临床过程及病理的转归、分子生物学、细胞学、分子病理学及临床诊断领域等。
具体应用举例如下:
1.在样品中目标核酸含量低,原位杂交法灵敏度不够时,可采用原位 PCR 以高特异性、高灵敏度检出样品内的微量核酸;

2.确定目的基因或病毒的亚细胞定位;

3.可用于确定拥有某目的基因的细胞数量或百分比,如协助确定感染某种特定病毒的细胞数量,或具有激活的病毒基因表达的细胞数量,具有肿瘤基因的细胞百分比,确定转移性肿瘤的来源等;

4.快速鉴定细菌物种等等。
RACE 实验
cDNA 末端快速扩增技术 (rapid amplification of cDNA ends, RACE) 是一种基于逆转录 PCR从低丰度的转录本中快速扩增 cDNA 的 5' 和 3’ 末端的有效方法。
需要得知 cDNA 两端序列信息时,或仅利用 poly(A) 尾无法获得全长 cDNA 时,可使用 RACE 技术快速且特异性的获得 cDNA 全长序列。

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策划|Olaf
配图|丁香实验设计团队


编辑: 王凯

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