引言：
PCR 产物回收可以算是整个实验中最令人头秃的一步。凝胶切大了影响回收效率，切小了容易丢失目的条带。手法不熟者，样本还会被紫外照射损坏，回收率也不咋高，眼睛一糊还可能切到自己，真不知道切坏了多少手套。不少科研汪感叹：宁可重做 PCR，也不再做胶回收。试问谁不想拥有 PCR 切胶神功，又快又好地回收目的条带？今天就为你送上 PCR 产物回收攻略！
PCR 产物的回收过程：
1. 切胶：紫外下切胶，称重。之后用枪头将胶块捣碎。切胶时确保操作的洁净，避免外界 DNA 污染，避免切到条带外的凝胶，且避免紫外照射时间过长（不能超过 30 秒）。
2. 溶胶：每 1 mg 胶加入 1 μL 膜结合液（MB），按比例 1:1 加入 MB，55 ℃ 水浴溶解。每 1～2 min 震荡混匀，待溶解后至少在水浴中保持 1～2 min，保证胶块完全溶解。
3. 结合：将溶胶转移至纯化柱内，12 000 rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将纯化柱重新插回收集管中。
4. 漂洗：向纯化柱正中加入 600 μL 漂洗液（预先加过无水乙醇），12 000 rpm 离心 30 s，去除废液。重复一次后，将纯化柱开盖离心 2 min，彻底去除残余漂洗液中的乙醇。
5. 洗脱：将纯化柱置于 1.5 mL 离心管中，向纯化柱正中加入 30 μL 洗脱缓冲液或无菌水，放置 1 min 后，12 000 rpm 离心 1 min，洗脱 DNA。
6. 保存：将获得的 DNA 片段于 -20 ℃ 保存，或直接用于后续实验。
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提高胶回收量的技巧：
1. 使用新鲜配置的电泳液，因为电泳液 PH 的升高会减少产量；
2. 增加电泳时的上样量；
3. 切胶时减小切胶体积，尽量只切有条带的部分；
4. 切好的胶融化后都用一个管子，转移到同一个柱子上；
5. 溶胶时所加的溶液可多一点，有利于 DNA 与膜的结合，不过一般不要超过 750 ul；
6. 胶块完全溶解后最好将胶液温度降至室温再上柱，因为纯化柱在温度较高时结合 DNA 的能力较弱；
7. 务必将洗脱缓冲液或无菌水加入纯化柱正中，若沾在管壁上，一定要震动离心管，使液体滑落。
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产品介绍
注：
1. 相关产品仅限科研使用，不作为临床诊断。
2. Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标
内容策划：王丹琦
内容审核：周育红
题图及文中图片来源：Bio-Rad
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