最近网上一则新闻，一名网友在离职前最后一天还被要求工作，并且被催促赶紧完成。要说这样的事一口回绝就不管了，然而却被当场 PUA，要求加班也要把工作做完。类似的事件不仅在职场上出现，科研实验室中 PUA 现象也屡见不鲜。
Nature 杂志曾在职业专栏发表了相关文章，在 2021 年对全球 2,000 多名科研人员（多为博士生或博士后）进行的一项调查发现，有近 65% 的受访博士后曾遭遇过权力失衡/欺凌[1]。
对于科研 PUA，想必大家都苦于想反抗又怕得罪人。那么如何有理有据，避免科研 PUA 呢？师兄我总结的经验就是，用事实说话！
之前和师兄一起做实验，我做的流式数据不被认可，被多次要求做无意义重复。不同意师兄的想法，却被批评是实验技能不行，一度精神崩溃。直到我拿出参考文献和实验对照，才说服了师兄认可实验结果。
所以想告诉大家的是，做实验时用事实说话的前提就是做好对照实验。就比如，在流式实验中，由于实验过程繁琐、变量多，因此想到得到可靠、有效的数据就必须要使用「同型对照」。它的存在排除了干扰信号，一定程度上保证了检测结果的准确性。
那这次就跟大家好好聊一聊，什么是同型对照？
同型对照（Isotype Control）是一种与流式抗体保持相似特性但缺乏特异性靶标的抗体。流式检测中，同型对照抗体用于阴性对照实验，帮助我们对特异性信号与非特异性背景染色进行区分，排除干扰信号，确保检测结果的准确性。
同型对照有什么作用？
抗体有时会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用、疏水作用、细胞表面的抗体受体结合细胞内成分。比如，IgG 亚型的抗体会结合细胞表面的 Fc 受体，如 CD16、CD32 和 CD64 等。Fc 受体的结合则可以通过与含免疫球蛋白的血清预孵育来阻断。所以一个抗体非特异性相互作用及与 Fc 受体结合的情况，都可以用无关抗原的相同亚型抗体来比照，即同型对照。
例：人外周血染色 Anti-Human CD33，APC（实线）和 Mouse IgG1 κ Isotype Control，APC（CMG104）（虚线）的结果。以 FSC/SSC 中的单核细胞设门进行分析。
什么时候需要选择同型对照？
胞内流式实验：比如胞内细胞因子、趋化因子、信号转导蛋白、转录因子等。
表面标志特异性不高或者不常见的：一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。
研究者对检测的靶标抗原了解较少，不确定其表达水平，或者研究者对样本的流式检测经验不充足时，可以用同型对照或阻断剂优化实验。
对流式非常熟悉，且检测的是 CD3、CD4、CD19 等表达强度非常高的标志，可以不使用同型对照。
怎样选择同型对照？
1、一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体。比如抗人的 CD56 FITC 标记的抗体，成份是 MouseIgG1，κ，那么它的同型对照应该是 FITC 标记的 MouseIgG1，κ。
2、如果抗体是组合形式，如纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如 CD86 的纯化抗体，成分是 Mouse IgG1，κ，它的同型对照是纯化的 Mouse IgG1，κ，它的二抗PE标记的抗小鼠 IgG1。
3、如果没有找到完全匹配的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同。比如，某种的抗体的来源是 Mouse IgG2а，κ，如果找不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记的抗体顺序依次为：Mouse IgG2а－－Mouse IgG2b－－Mouse IgG2 作为同型对照。
联科生物同型对照产品列表
杭州联科生物专注免疫检测二十年，拥有小鼠常见亚型 Mouse IgG1，κ，Mouse IgG2a 和 Mouse IgG2b 共 9 种常见标记的同型对照产品如下表，如果有需要的小伙伴记得联系联科生物咨询购买就可以啦！
内容策划：邹礼平
内容审核：邱天天
题图来源：图虫创意
参考文献
[1] Woolston C. Postdocs under pressure: 'Can I even do this any more?'. Nature. 2020 Nov;587(7835):689-692. doi: 10.1038/d41586-020-03235-y. PMID: 33230311.
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