🙇：师兄！细胞实验又又又扎堆了，导师让我做原代培养、转染、ROS、粘附实验，这周一个数据也没做出来，明天组会肯定要被老板骂了！
👨⚕️：实验不出数据，是方法不对吧！我的 8 年沉淀 protocol 用了吗？快点收藏吧！
1 siRNA 转染
2 稳转细胞系的构建
稳转株全称是稳定表达细胞株，通常是指基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系，通过慢病毒感染能够将外源 DNA 克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，从而筛选得到可稳定表达目的蛋白或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
3 原代细胞培养
小鼠原代肠胶质细胞分离培养：参考无血清培养法去除雪旺细胞培养中成纤维细胞污染的方法，结合目前已有的肠肌间神经丛神经胶质细胞原代分离、培养法的报道。
我们对小鼠结肠胶质细胞进行分离培养，获得了纯度较高且活性良好的结肠肌间神经丛肠胶质细胞。👉点此查看 protocol
4 DCFHDA 检测细胞内总活性氧？
应用荧光探针 DCFHDA 检测细胞内总 ROS 水平，DCFHDA 探针本身不带荧光，可以自由穿过细胞膜，其进入细胞后，在细胞内酯酶的作用下被水解成 DCFH，DCFH 不能穿过细胞膜，因而滞留在细胞内，之后由 ROS 介导的氧化生成荧光物 DCF（激发波长 λex = 485 nm，发射波长 λem = 530 nm）。
因此，我们可以通过检测 DCF 的荧光强度评估细胞内 ROS 的水平。👉点此查看 protocol
5 MitoSOX 测定线粒体活性氧
线粒体的主要 ROS 类型是线粒体氧化磷酸化（OXPHOS）副产物超氧阴离子。MitoSOX 是一种选择性在线粒体内长期滞留而不外漏的染色剂，其进入细胞后，会被线粒体内超氧阴离子氧化产生红色荧光。探针的这种氧化过程可被超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）抑制。
因此，MitoSOX 可高选择性的用于检测活细胞线粒体内 ROS。👉点此查看 protocol
6 细胞粘附实验
细胞粘附，指的是单个细胞粘附到另一个细胞或其他一些无生命体表面的能力，比如，细胞外基质。一旦细胞黏附发生异常，就会出现严重的病理变化，包括肿瘤的转移、浸润和抵抗凋亡等，本实验通过检测细胞粘附来探究细胞的转移能力。
👉 点此查看细胞粘附实验（MTT比色法计数）👉 点此查看细胞粘附实验（显微镜直接计数）
以上就是丁香实验最新上线的经典实验 protocol。如果以上内容不能解决你自己的实验问题，也可以进入小程序进行提问，48 小时内有问必答。海量细胞培养经验的硕博士，会替大家答疑解惑。一起来优化细胞实验吧！
更多实验问题👇点击进入丁香实验小程序👇
策划｜Olaf配图｜丁香实验设计团队