荧光定量 PCR（qPCR）是实验室常用的一种技术，该技术可以应用于基因表达分析、基因分型、病原体检测、SNP 分析等。qPCR 实验操作简单，原理易懂，但什么结果是理想的呢？今天教你学会如何看懂 qPCR 实验结果！
qPCR 数据分析的关键
qPCR 数据分析主要是利用 Cq 值进行计算，所以我们需要了解 qPCR 反应中几个重要的参数，根据参数的表现来进行实验评估。
扩增曲线：图 1 反映的是荧光信号变化量的对数与 qPCR 反应循环数的关系。图 2 反映的是随着 qPCR 反应的进行相应的荧光信号的变化，比较直观，但是指数期很短。标准的扩增曲线是呈现出「S」型，具有特征性的形状：首先背景信号，然后是三个增长阶段（指数增长期、线性增长期和平台期）。
图 1：扩增曲线对数图谱
图 2：扩增曲线线性图谱
基线：通常 3～15 个循环时，荧光信号变化不大，变化趋势接近于一条直线，即扩增曲线的水平部分，这样的直线就是基线。同一次反应中针对不同的基因需单独设置基线。
阈值：是荧光信号相对于基线有显著增强的点，大多数仪器会根据基线平均信号，自动计算荧光信号的阈值水平，并设置一个比平均值高 10 倍的阈值。手动设置是置于指数扩增期，刚好可以清楚地看到荧光信号明显增强。每次改变阈值时，要查看标准曲线的斜率和 R 的平方有没有改善。
Cq 值：qPCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数，与起始浓度的对数成线性关系。分析定量时一般取 Cq：15～35，太大或者太小都会导致定量的不准确。
图 3：扩增曲线
熔解曲线：判断扩增的特异性，理想的熔解曲线具有锐利的单峰，证明 qPCR 实验中只可以检测到目的基因，引物特异性扩增靶序列，而没有扩增其他基因序列。
图 4：熔解曲线
GenStar qPCR 试剂特点
易检：荧光强度高，易检测。
更高：热启动 DNA 聚合酶，扩增效率更高，特异性更强。
更适：灵敏度更高，适合低拷贝基因。
更稳：重复性好，跨度均一产品性能稳定。
更低：使用方便，性价比高，实验成本更低。
GenStar qPCR 试剂试用反馈结果展示
今天为大家精心挑选了部分有代表性的结果，我们一起来看看吧！
1. 细胞 cDNA
2. 酵母 cDNA
3. 鼠单核细胞株 cDNA
4. 质粒 DNA
5. 细胞
看完以上结果展示，有没有心动呢，快来点击下方链接进入商铺了解详情吧！
内容审核：潘成
项目审核：钟可可
题图来源：图虫创意
点击阅读原文，进入商铺了解详情吧！
↓↓↓