原代/传代细胞总是不贴壁状态不好?
流式细胞术样本如何处理?为何碎片多?
细胞免疫荧光 IF,如何优化?
别担心,丁香实验上线细胞实验锦囊专题,汇集培养、IF 荧光染色、流式细胞术等常见细胞实验经典问题。并邀请有 3 年以上细胞培养经验的硕博实验高手,替大家答疑解惑。一起来优化细胞实验吧!(本文内容来自👉 细胞实验锦囊,提前订阅防走丢)

细胞复苏培养
Q 细胞冻存放置于负 80 度冰箱一般能够保存多久?
冻存前细胞较好,冻存时操作无误及试剂是新鲜的,则在 -80℃ 冰箱冻存的细胞一般半年左右复苏培养时完全没有问题;但若是长期不做,或阶段性实验完成,可将细胞转入液氮冻存,保证下次使用时细胞是可用的。
Q 如何防止细胞污染?
首先,全程注意无菌操作;
其次,所用器材高压灭菌,试剂若不是无菌则需要 0.22 μm 水系或有机系过滤器进行灭菌;
最后,可在培养基中加入 1% 的双抗,防止污染。

流式细胞术
Q 流式细胞学检测时,为什么有很多碎片?
原因可能有 5 个:
❶ 固定时间太长会让细胞碎片增多;
❷ 重悬细胞不建议用旋涡震荡,可使用吸头吹吸,注意不要吹起气泡;
❸ 消化过度,可适当降低浓度或减少用量来降低胰蛋白酶消化对细胞的损伤;
❹ 传代后次日细胞换液,先用缓冲液漂洗两次以洗去未贴壁的细胞及细胞碎片,再加入新的培养液继续培养;
❺ 最后,确保细胞是新鲜收集的,否则容易出现大量死细胞和碎片。

细胞免疫荧光
Q 免疫荧光染色如何分析统计?
免疫荧光主要判断目的蛋白的定位,实验过程中会染表征细胞核的 DAPI。拿到免疫荧光结果,使用 PS 等软件进行 merge,如果染色结果只在 DAPI(蓝色)周围有一圈,即细胞膜定位;如果染色结果显示 DAPI 周围到处都有,即胞浆定位;如果染色结果和 DAPI 完全 merge,即细胞核定位。
接下来,定量化细胞骨架。点击 Image → Type → 8-bit 可以二值化图像转换成黑白,分析骨架 Analyze → Skeleton → Analyze Skeleton (2D/3D)。
最后进行面积测定。图像转为 8-bit 后,调整阈值,框选细胞及核,Analyze → Set Measurements,可以 Measure 细胞整体面积或单个面积。

以上就是丁香实验最新上线的「细胞实验锦囊」专题内容,汇集培养、IF 荧光染色、流式细胞术等常见细胞实验经典问题。
如果以上内容不能解决你自己的实验问题,也可以进入小程序进行提问,48 小时内有问必答。海量细胞培养经验的硕博士,会替大家答疑解惑。
更多实验问题👇点击进入丁香实验小程序👇

策划|Olaf配图|丁香实验设计团队