师弟
救命啊师兄！为什么我的 Tubulin 没有条带？不应该啊…
苍天饶过谁，内参蛋白的条带压到靶蛋白了！
师妹
师弟
为什么我的内参明明调好了，就是不齐呢？
为啥昨天内参是好的，目标蛋白歪了，今天目标蛋白平了，内参又歪了？太倒霉啦！谁来帮帮我。
师妹
大家是否也在为如何做出漂亮的内参条带而苦恼不已呢？内参对 WB 的重要性毋庸置疑。它的作用在于排除上样量/浓度不同、蛋白迁移率差异、蛋白转印效率差异等种种问题，确保样品间表达水平的差异是由细胞裂解物的实际蛋白水平导致。但总会有这样或那样的原因导致内参结果不好，稍不注意都可能会前功尽弃。今天我们就来讲讲内参蛋白的选择相关经验和注意事项，希望能帮到大家（文末含惊喜福利哦😉）～
蛋白分子量
第一要点是选择分子量与靶标蛋白差异较大的内参抗体，以确保两种蛋白在检测过程中不会重叠。一般建议目的蛋白与内参蛋白分子量相差大于 5kDa。
样品类型
根据样品的类型和靶蛋白的细胞定位，选择具有高表达水平的组成型内参抗体。比如，如果样品是细胞裂解液，细胞质蛋白可以选择 GAPDH 或 Beta-tubulin，核蛋白可以选择 Histone H3 等；如果样本是线粒体裂解液，则可以选用线粒体内高表达的细胞色素 C 等。
表达因素
选择不受环境因素影响的内参蛋白。比如，GAPDH 是糖酵解中的一个酶，在缺氧和糖尿病等疾病下它的表达会增加，因此 GAPDH 一般不适合用作代谢相关研究的内参蛋白。可以通过取相同量的不同实验条件下的裂解物或样本，进行蛋白质免疫印迹确定。
宿主
如果您要进行多重免疫印迹（同时使用靶向目标蛋白和内参蛋白的一抗），则所选内参抗体的宿主应不同于靶向目标蛋白的一抗宿主。
蛋白质 PTM
在研究蛋白质翻译后修饰（PTM）时，一般选择未经修饰或完整的目标蛋白作为内参抗体，效果优于通用内参抗体。譬如当需要检测 p38 的磷酸化情况，建议选用 p38 当做内参蛋白。
多物种覆盖
在研究跨物种的蛋白质时，使用具有适当跨物种反应性的上样内参。
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总的来说，内参蛋白的选择需要综合考虑以上因素，不能单一而论，这样才能有高质量准确的数据。今天小编为大家整理了日常使用的内参蛋白：
当然，工欲善其事必先利其器，想要做出漂亮的内参条带，还需要高质量、稳定的抗体。Invitogen 内参抗体可针对多种不同样本类型和细胞定位的靶蛋白。经高级验证的内参抗体在特异性和稳定性上更有保证，为您提供更准确的实验结果。今天我们为大家带来了赛默飞促销福利，爆款内参抗体直接送呢！千万不要错过哦！
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内容审核：邹礼平
项目审核：吴军
题图来源：图虫创意
图片来源：赛默飞
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