蛋白纯化主要分为两个步骤：将目的蛋白和其他细胞成分如 DNA、RNA 等污染物分开，以及让目的蛋白与杂蛋白分开。在这个过程中，用好缓冲液、标签、层析柱，可以让你的纯化事半功倍。
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缓冲液
● 蛋白质在其等电点附近的 pH 值溶液中容易沉淀，缓冲液的 pH 需要避开等电点。
● 缓冲液体系成分需要维持蛋白稳定性和活性，常用的有磷酸缓冲液（pH 5.8~8.0）、MOPS 缓冲液（pH 6.5~7.9）、HEPES 缓冲液（pH 6.8~8.2）和 Tris 缓冲液（pH 7.5~9.0）。
● 适当的添加剂也可以帮助纯化，除了蛋白酶抑制剂，还可以添加金属螯合剂如 EDTA，可与 Mg2+结合以防止目标蛋白质被所含的金属蛋白酶分解，还可以添加甘油增加蛋白的可溶性。
标签
标签的选择需要有利于蛋白的纯化且不影响蛋白本身的结构，常用的标签有：
● 6xHis-Tag：分子量小，对目的蛋白的构象功能没有影响，免疫原性相对较低可进行动物实验，缺点是特异性较低。
● Strep-Tag：纯化流程温和，可以帮助获得高纯度（95%）的目标蛋白，且能保持目标蛋白活性，缺点为价格较高且产量较低。
● GST-Tag：可以提高蛋白表达的可溶性和蛋白的表达量，适合 pull-down 检测，缺点为分子量较大（约为 26KD），可能会影响蛋白质的功能和下游实验
层析柱
一般在进行目的蛋白与杂蛋白分离时使用层析柱，利用蛋白不同的理化性质来进行纯化离，常用的层析柱有以下几种类型：
层析种类 | 分离原理 | 结合部分 |
亲和层析 | 特异性结合作用 | 无竞争配体 |
离子交换层析 | 表面电荷 | 低离子强度 |
疏水层析 | 疏水作用 | 高离子强度 |
凝胶过滤层析 | 蛋白大小差异 | 低离子强度 |
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内容策划：王丹琦
内容审核：杰西
题图来源：自制